PNG hematologija. Bolezen Markiafava-Mikeli (paroksizmalna nočna hemoglobinurija)

Imetniki patenta RU 2574968:

Izum se nanaša na medicino, in sicer na laboratorijsko diagnostiko, in se lahko uporablja za diagnosticiranje paroksizmalne nočne hemoglobinurije. V ta namen vzorce krvi obarvamo z monoklonskimi protitelesi CD235a (FITC) / CD59 (PE) / CD71 (APC). Prisotnost klona PNH med eritrociti in retikulociti se oceni z odsotnostjo zaščitnega proteina CD59 na membrani retikulocitov, izoliranih z vrati CD235a, markerjem pan-eritrocitov in receptorjem za CD71 transferin. Za oceno klona PNH med retikulociti v vratih CD71 + se zbere vsaj 20.000 dogodkov, odvisno od vrat CD71 + se nariše graf FSC (log) vs SSC (log), na katerem se retikulociti izolirajo z dodatnim CD71str vrata, s čimer se populacija retikulocitov očisti iz naplavin in dvojnikov z uporabo metode zaporednih vrat. V prisotnosti 100% pozitivnih rezultatov na CD59 retikulocite presodijo odsotnost klona PNH in diagnosticirajo odsotnost paroksizmalne nočne bolezni hemoglobinurije. Ko se odkrije pri bolniku z klinični simptomi negativni CD59 retikulociti in vrednost dobljenih kazalcev več kot 1% dajejo diagnostični zaključek o prisotnosti PNH-klona in za potrditev diagnoze paroksizmalne nočne hemoglobinurije je v skladu z mednarodnim standardiziranim protokolom priporočljiva dodatna študija. Pri odkrivanju negativnega za CD59 retikulocitov in vrednost dobljenih indikatorjev je 0,1-1%, se presodi prisotnost manjšega klona PNH in je priporočljivo po 6 mesecih ponovno določiti PNH klon za povečanje njegove vrednosti in razvoj paroksizmalne nočne hemoglobinurije in po potrditvi te velikosti je klon diagnosticiran s subklinično obliko paroksizmalne nočne hemoglobinurije brez klinični znaki... Uporaba večparametrskega zapiranja celic CD71 + omogoča, da iz analize izključimo ostanke, dublete in nespecifično vezana monoklonska protitelesa. 1 bolnik

Izum se nanaša na medicino, in sicer na klinične in laboratorijske diagnostične metode, in se lahko uporablja za presejalno diagnostiko paroksizmalne nočne hemoglobinurije (PNH).

Paroksizmalno nočna hemoglobinurija se nanaša na redke bolezni.

PNH je posledica mutacije gena PIG-A. Posledično je motena sinteza sidra glikozilfosfatidilinnositola (GPI), ki fiksira številne molekule na membrani krvnih celic (vključno s CD24 na granulocitih, CD14 na monocitih, CD59 na eritrocitih in njihovih predhodnikih), ki ščitijo krvne celice pred sistem dopolnil.

Na eritrocitno membrano najbolj vplivajo membrane napadajočega kompleksa, v odsotnosti zaščitnega proteina CD59 pa se eritrociti podvržejo hemolizi.

Za PNH so značilne intravaskularna hemoliza, anemija, hemoglobinurija, trombotični zapleti, disfagija, letargija, erektilna disfunkcija, kronična ledvična odpoved, pljučna hipertenzija.

Poleg tega se klon PNH lahko pojavi pri aplastični anemiji, avtoimunski hemolitični anemiji in mielodisplastičnem sindromu. Starostna mediana pojavnosti PNH je 30-35 let. Incidenca paroksizmalne nočne hemoglobinurije je od 1 do 10: 1 milijon ljudi. Smrtnost brez zdravljenja paroksizmalne nočne hemoglobinurije je približno 5% v 5 letih od začetka bolezni.

Zdaj so se pojavile celične tehnologije, ki so omogočile razvoj sodobne metode zdravljenje te bolezni.

V zvezi s tem je bilo treba ustvariti natančne diagnostične metode. učinkovitost in ustreznost zdravljenja je odvisna od informativnosti, objektivnosti in dokazov diagnostičnih ukrepov ter popolnosti prejetih informacij, kar omogoča oceno prisotnosti klona PNH in razjasnitev diagnoze.

Znana metoda za odkrivanje PNH po metodi Hem za diagnozo paroksizmalne nočne hemoglobinurije (Abdulkadyrov KM, Clinical Hematology, Handbook - St. Petersburg: Peter, 2006, str. 82), ki temelji na stimulaciji inaktivacije sistema komplementa kot posledica zakisanja vzorca krvi in \u200b\u200bpovečane občutljivosti nanj eritrocitov bolnikov s paroksizmalno nočno hemoglobinurijo. Rezultat Hemovega testa se oceni vizualno.

Metoda je v tem, da se darovalčevemu krvnemu serumu doda 0,2 normalne raztopine HCl, kar je po sistemu antigena ABO primerljivo s pacientovim serumom, njegov pH v serumu se bo spremenil na 6,4 in s tem povzročila aktivacijo komplementa ( razmerje seruma in kisline je 9: ena). Nato deset volumnov zakisanega seruma zmešamo z enim volumnom 50% suspenzije izpranih eritrocitov. Nato naredite vizualno oceno nastale suspenzije. Pri paroksizmalni nočni hemoglobinuriji pride do hemolize eritrocitov in suspenzija postane rdečkasto ali rdeče obarvana, medtem ko se običajni eritrociti v enakih pogojih ne hemolizirajo.

Vendar tehnika nima zadostne občutljivosti za odkrivanje manjših klonov PNH: najmanjša zaznavna velikost klonov je 4,2-5%. Hemova metoda ne daje informacij o velikosti klona.

Vse to ne omogoča ocene klona PNH kot odstotka, ki je ob odkritju bolezni med presejanjem izhodišče za nadaljnje spremljanje in ustrezno zdravljenje.

Poleg tega je tehnika zelo mučna in ne ustreza sodobnim diagnostičnim zahtevam.

Znana je tudi metoda za diagnosticiranje paroksizmalne nočne hemoglobinurije s testom saharoze ("Problemi hematologije in transfuzije krvi", 1972, avgust, 17 (8) 55-7, "Vrednotenje testa saharoze za diagnosticiranje paroksizmalne nočne hemoglobinurije", Idelson LI, Benisovich V.I., Savina L.S., Radzhivilovskaya E.G.).

Metoda temelji na povečani občutljivosti eritrocitov bolnika s paroksizmalno nočno hemoglobinurijo na beljakovine komplementarnega sistema, v tem primeru zaradi dodajanja saharoze.

Pacientovim eritrocitom se doda svež darovalni serum, enak v pacientovi krvni skupini. Eritrocite trikrat speremo v fiziološki raztopini (0,145 M NaCl), 900 μl raztopine saharoze dodamo 100 μl citrirane ali defibrirane krvi in \u200b\u200binkubiramo 30 minut pri 37 ° C ali 23 ° C. Nato epruvete centrifugiramo in nato supernatant ocenimo na vidno hemolizo. Če pride do hemolize, se njena stopnja, izražena v odstotkih, izračuna iz koncentracije hemoglobina v supernatantu, ki se določi z metodo cianmethemoglobina.

Vzorce polne krvi zmešamo v razmerju 9: 1 z 3,2% raztopino natrijevega citrata ali 0,1 M oksalata, polno kri pa defibriramo z dodajanjem 4 mm steklenih kroglic na 2 ml krvi. Alikvoti polne krvi in \u200b\u200bplazme brez trombocitov se mešajo v različnih razmerjih. Izotonično raztopino saharoze pripravimo z raztapljanjem 0,27 mol posebnega reagenta saharoze v 91 ml 50 mM NaH2P04 in 9 ml NaHPO4. PH se po potrebi prilagodi na 6,1 z majhnimi koncentracijami NaOH. Končni volumen se napolni s 1000 ml vode.

Epruvete centrifugiramo in supernatant ocenimo na vidno hemolizo. Odstotek hemolize je izračunana vrednost, izračunana iz koncentracije hemoglobina v supernatantu, določene z metodo cianmethemoglobina. Za oceno vzorca smo pripravili še dva alikvota, 100% hemolizo in "nič" hemolizo (brez eritrocitov).

Pomanjkljivost te metode je pomanjkanje občutljivosti in specifičnosti za diagnozo bolezni: najmanjša zaznavna velikost klona - 4,2-5% ne daje natančne predstave o velikosti klona, \u200b\u200bčeprav je lahko prisotna v bolnikovem kri pri nižjih vrednostih - manj kot 4,2%. Slabosti te metode lahko pripišemo tudi njeni zapletenosti.

Znana je tudi metoda za diagnozo PNH-klona (Rosse WF. Variacije rdečih celic pri paroksizmalni nočni hemoglobinuriji. Br J Haematol 1973; 24: 327-42. 12), vključno z merjenjem in analizo stopnje hemoliza pri različnih koncentracijah komplementa. Ta analiza kaže, da se celice PNH lizirajo v nižjih koncentracijah kot običajne celice.

S pomočjo tega testa se določijo populacije celic z vmesno občutljivostjo na beljakovine komplementarnega sistema (tip II) med normalnimi eritrociti (tip I) in nenormalnimi eritrociti v paroksizmalni nočni hemoglobinuriji (tip III). Vendar je metoda zahtevna in jo je težko standardizirati. Pri uporabi testa lahko manjkajo majhne populacije nenormalnih celic.

Znana je metoda izolacije retikulocitov v skladu s CD71 za določanje klona PNH s pretočno citometrijo med retikulociti in granulociti (Tsagarakis NJ, Paterakis G. Asimple pretočni citometrični test za rutinsko paroksizmalno nočno testiranje hemoglobinurije na podlagi nezrelih retikulocitov in granulocitov 07. 259-263) (http: //onlinelibrary.wiley.coni/doi/10.1002/cyto.b.21030/full).

Pacientu se pregleda celotna kri, ki se razredči v fiziološki raztopini s fosfatnim puferjem 1: 100. V dve epruveti dodamo 50 μl razredčene krvi, nato izvedemo barvanje: v prvi epruveti 10 μl monoklonskih protiteles (MCA) proti CD71 in 20 μl MCA proti CD59; V drugo epruveto dodamo 10 μl izotipične kontrole IgGl. Vrednotenje rezultatov se izvede na enoparametrskih histogramih.

Poleg tega metoda analizira tudi granulocite z uporabo kombinacij MCA: 1) CD59-FITC / CD24-PE / CD45-PE-Cy5 /; 2) CD66b-FITC / CD16-PE / CD45-PE-Cy5.

Po tej metodi je občutljivost določanja klona PNH med granulociti 1%, občutljivost določanja klona PNH med retikulociti pa 5%. Predlagana metoda pa je bila preizkušena na majhnem številu bolnikov s paroksizmalno nočno hemoglobinurijo (n \u003d 8) in s klonom PNH manj kot 1% (če se oceni na granulocitih in s tem manj kot 5%, ko se določi na retikulocitih). (n \u003d 7). Občutljivost določanja klona na retikulocite (5%) ne omogoča uporabe tehnike za hkratno oceno klona med granulociti in retikulociti. Hkrati med vzorci krvi bolnikov s sumom na PNH ni bilo nobenega z velikostjo klonov 1–24%, kar ne daje popolne slike o korelaciji vrednosti v tem območju. S tem pristopom je oteževanje pretoka retikulocitov zaradi odsotnosti pan-eritrocitnega markerja (CD235a) na plošči, kar je še posebej potrebno za izolacijo čiste populacije in rezanje ostankov in dubletov. Poleg tega je za objektivno oceno klona PNH treba oceniti na desettisoče celic. En test po predlagani metodi porabi veliko število protiteles. Skupno število zbranih dogodkov vrat (v skladu s CD71) (2000 dogodkov) morda ne bo dovolj za identifikacijo klona.

Tako je bila znana metoda preizkušena na majhnem številu bolnikov s paroksizmalno nočno hemoglobinurijo in klonom PNH, pri čemer bodo celice, ki niso specifično vezane na MCA na CD71, verjetno izkrivile rezultate analize. Poleg tega se za to analizo uporablja 6 vrst monoklonskih protiteles, od tega 2 dvakrat, kar se odraža v visokih stroških uporabljene plošče MCA. Metoda je bila preizkušena na 8 bolnikih s PNH, 7 od njih je imelo vrednost klona pod pragom občutljivosti (1% za granulocite, 5% za retikulocite). Ta metoda ne reši problema zanesljivega odkrivanja manjših klonov PNH in ni dokaz visoke občutljivosti metode.

Kot najbližji analog obstaja znana metoda za diagnosticiranje paroksizmalne nočne hemoglobinurije s pomočjo pretočne citometrije, ki jo predlaga Mednarodno združenje za klinično citometrijo (ICCS). (Michael J. Borowitz, Fiona E. Craig, Joseph A. DiGiuseppe, Andrea J. Illingworth, Wendell Rosse, D. Robert Sutherland, Carl T. Wittwer, Stephen J. Richards. Smernice za diagnozo in spremljanje paroksizmalne nočne hemoglobinurije in s tem povezane motnje s pretočno citometrijo, na spletu: 28. APR 2010 DOI: 10.1002 / cyto.b.20525).

Metoda vključuje preučevanje prisotnosti proteinov, vezanih na GPI, na granulocitih, monocitih in eritrocitih. Študija je sestavljena iz dveh stopenj: priprava vzorca in nadaljnja analiza na pretočnem citometru.

Za analizo eritrocitov polno kri razredčimo s PBS v razmerju 1: 100, 9 μl fiziološke raztopine, puferirane s fosfatom, dodamo 10 μl polne krvi; Nato v označeno epruveto dodamo 40 μl nastale celične suspenzije. Za obarvanje eritrocitov v celično suspenzijo dodamo monoklonska protitelesa, konjugirana s fluorokromi, označenimi s CD235FITC in PE z oznako CD59. Po 30-minutni inkubaciji z monoklonskimi protitelesi v temi vzorce izperemo iz nevezanih monoklonskih protiteles. Za analizo eritrocitov izperemo dvakrat s centrifugiranjem vzorca v 4 ml fosfatno-fiziološkega pufra pri 1500 približno 5 minutah, nato odvzamemo supernatant, celice resuspendiramo, 500 μl fosfatno-fiziološkega pufra dodamo še za analiza.

Za zbiranje in analizo eritrocitov na pretočnem citometru z uporabo programske opreme instrumenta so zgrajeni grafi:

Plot-FS (log) proti (proti) SS (log), pri katerem je populacija eritrocitov izolirana (ustvarja vrata RBC) in odstranjeni ostanki, trombociti in agregati rdečih krvnih celic;

CD235a (log) vs FS (log) načrtuje dogodke od vrat RBC, da jasneje poudari CD235a pozitivno populacijo rdečih krvnih celic, ustvari nova vrata (CD235a +)

CD59 (log) v primerjavi s CD235a, (histogram prikazuje dogodke, ki jih je zaprl CD235a +). Histogram odraža stopnjo ekspresije CD59 na eritrocitih. Celice brez pomanjkanja CD59 - tip I so normalni eritrociti, celice z delnim pomanjkanjem ekspresije CD59 - klon PNH tipa II, celice, ki ne izražajo CD59, to je eritrociti s popolnim pomanjkanjem CD59, so klon tipa III PNH.

Po metodologiji se zbere najmanj 50.000 citometričnih dogodkov.

Za pripravo na analizo granulocitov in monocitov dodajte 100 μl periferne krvi v dve označeni epruveti. Nadalje za obarvanje z označenimi monoklonskimi protitelesi dodajte v svojo epruveto svojo kombinacijo označenih monoklonskih protiteles:

kombinacija označenih monoklonskih protiteles za določitev klona PNH med granulociti FLAER (AlexaFluor700) / CD15 (PE) / CD24 (PerCP) / CD45 (PE-Cy7) (markerji za zapiranje: CD45 in CD15, GPI - povezani markerji FLAER in CD24) ;

kombinacija označenih monoklonskih protiteles za določitev klona PNH med monociti FLAER (AlexaFluor700) / CD14PE / CD64PerCP / CD45PE-Cy7, pri čemer sta označevalca zapiranja CD45 in CD64, GPI so povezani markerji FLAER in CD14;

Obarvani vzorci se inkubirajo 30 minut pri sobna temperatura v temi, nato pa vzorcu dodamo 1 ml raztopine za lizo, da se znebimo eritrocitov. Po inkubaciji z raztopino za lizo vzorce 5 minut centrifugiramo pri 1500 vrt / min, po centrifugiranju supernatant odcedimo, levkocite na dnu epruvete ponovno suspendiramo. Nato vzorce izperemo iz raztopine za lizo, tako da vzorcu dodamo 2 ml fosfatno-fiziološkega pufra in nato centrifugiramo 5 minut pri 1500 vrt / min. Po centrifugiranju supernatant odlijemo, celice resuspendiramo, nato dodamo 500 μl fiziološke raztopine, puferirane s fosfatom, za nadaljnjo analizo.

Za analizo in zbiranje granulocitov in monocitov na pretočnem citometru z uporabo instrumentne programske opreme so zgrajeni naslednji grafi:

Na grafu CD45 (log) v primerjavi s SS, območja limfocitov CD45 + LY (celice območja z visoko ekspresijo CD45, nizke vrednosti SS), monociti CD45 + MON (celice s površino medija ekspresija CD45, višje vrednosti SS) in granulociti CD45 + GRAN (območja celic z nizko ekspresijo CD45, visoke vrednosti SS).

Za analizo klona PNH med granulociti je narisan graf CD 15 (log) v primerjavi s SS, odvisno od vrat (CD45 + GRAN). Z uporabo vrat CD15 + se izolira populacija granulocitov brez ruševin in celic, ki se niso vezale na monoklonska protitelesa proti CD15;

Histogram FLAER (log) v primerjavi s CD24 (log) (narisan na vrata CD15 +. Ta graf nariše vrata PNH GRAN, ki zajemajo negativno območje za izražanje CD24 in FLAER. Odsotnost teh označevalcev na granulocitih kaže, da celice pripadajo klonu PNH.

Za oceno klona PNH med monociti je narisan diagram -CD64 (log) vs SS v primerjavi z vrati CD45 MON. V tem grafu so pozitivni dogodki C064 omejeni na vrata CD64 + MON. Glede na vrata CD64 + MON se nariše graf -FLAER (log) v primerjavi s CD14 (log) (odvisno od izbrane populacije CD64 + monocitov - vrata). Na tem grafu so zgrajena vrata PNH MON, ki pokrivajo območje, negativno za izražanje CD14 in FLAER. Odsotnost teh markerjev na monocitih kaže, da celice pripadajo klonu PNH.

Vrednost klona PNH je odstotek celic (granulociti, monociti, eritrociti), med katerimi ni sidrnih proteinov, povezanih z GPI.

Študija klona PNH po mednarodnem protokolu je "zlati standard" pri diagnozi PNH. Vendar so raziskave drage in dolgotrajne. Priprava in analiza po tej metodi traja vsaj 2,5-3 ure.

Ker je PNH redka bolezen, po različnih virih zboli od 1 do 10 ljudi na 1 milijon prebivalstva, večina bolnikov, napotenih na diagnostiko klonov PNH, ne bo pozitivna na PNH. Posledično je zahtevna in draga analiza po mednarodnem protokolu neprimerna za bolnike brez PNH in dovolj je le odgovoriti na vprašanje, ali je klon PNH prisoten ali ne. Stroški označenih monoklonskih protiteles se začnejo pri 500 USD za en izdelek bo celoten nabor protiteles in reagentov za diagnostiko PNH po mednarodnem pristopu stal od 5000 USD. Glede na kratek rok uporabnosti nekaterih zahtevanih reagentov, tudi v mestu z 1 milijonom prebivalcev, je mogoče z enim kompletom letno pregledati od 10 do 100 bolnikov, stroški enega testa pa lahko znašajo tudi do $ 500.

Cilj izuma je ustvariti natančno, občutljivo in na dokazih temelječo metodo laboratorijske diagnoze paroksizmalne nočne hemoglobinurije, ki je enostavna za izvedbo, dostopna in omogoča presejanje paroksizmalne nočne hemoglobinurije z minimalnimi materialnimi stroški.

Bistvo izuma je v tem, da je pri metodi laboratorijske diagnoze paroksizmalne nočne hemoglobinurije, vključno z obarvanjem pacientove polne krvi z monoklonskimi protitelesi v fosfatno puferirani fiziološki raztopini, inkubacijo, izpiranjem krvnih celic iz nevezanih monoklonskih protiteles s centrifugiranjem, resuspenzijo končni vzorec ali naknadna ocena velikosti klona, \u200b\u200bnjegova odsotnost v programu pretočnega citometra zaradi odsotnosti ali prisotnosti zaščitnih beljakovin, trikolorna kombinacija monoklonskih protiteles CD235a (FITC) / CD59 (PE) / CD71 (APC) , ki ga dodamo v epruveto za vzorčenje, prisotnost klona PNH med eritrociti in retikulociti ocenimo z odsotnostjo zaščitnega proteina CD59 na membrani retikulocitov, izolirani z vrati CD235a - markerjem pan-eritrocitov in receptorjem za CD71-transferin ; za oceno klona PNH med retikulociti v vratih CD71 + se zbere vsaj 20.000 dogodkov, odvisno od vrat CD71 + graf FSC (log) v primerjavi s SSC (log), na katerem so z dodatnimi vrati CD71str izolirani retikulociti, s čimer se z metodo zaporednega čiščenja očisti populacija retikulocitov iz naplavin in dubletov, dobljene vrednosti kazalnikov z merili norme in ob prisotnosti 100% pozitivnih CD59 retikulociti nimajo klona PNH in diagnosticirajo odsotnost paroksizmalne nočne hemoglobinurije. Če se odkrije bolnik s kliničnimi simptomi negativnih CD59 retikulocitov in je vrednost dobljenih indikatorjev več kot 1%, dajo diagnostični zaključek o prisotnosti PNH-klona in za potrditev diagnoze paroksizmalne nočne hemoglobinurije, dodatno študijo je priporočljivo v skladu z mednarodnim standardiziranim protokolom pri odkrivanju negativnega za CD59 retikulocitov in vrednosti Pridobljeni kazalniki 0,1-1% ocenjujejo prisotnost manjšega klona PNH in priporočajo ponovno določitev klona PNH po 6 mesecih za povečanje njegova vrednost in razvoj paroksizmalne nočne hemoglobinurije; ko se potrdi ta velikost klona, \u200b\u200bse diagnosticira subklinična oblika paroksizmalne nočne hemoglobinurije brez kliničnih znakov ...

Uporaba izuma omogoča pridobitev naslednjega tehničnega rezultata.

Predlagana metoda za odkrivanje klona PNH ima visoko zanesljivost, natančnost in občutljivost - 0,1%, primerljivo z mednarodno standardizirano metodo in temelji na dokazih.

Omogoča določitev prisotnosti klonov PNH tako pomembne velikosti pri bolnikih z resnično paroksizmalno nočno hemoglobinurijo in manjših - od 0,01 do 1% pri bolnikih z aplastično anemijo in mielodisplastičnim sindromom.

Metoda je enostavnejša pri izvedbi in ne zahteva velikih materialnih stroškov v primerjavi z mednarodno standardizirano metodo.

Tehnologija zaznavanja klonov PNH omogoča uporabo najmanjšega števila (treh) monoklonskih protiteles pri presejanju PNH (CD235a, CD71, CD59).

Za preučevanje krvi enega bolnika se uporablja samo ena epruveta, kar tudi poenostavi in \u200b\u200bpospeši analizo.

Čas, potreben za en test, je 40-50 minut. Uporaba manj protiteles brez uporabe raztopin za lizo naredi test za približno 75% cenejši na test. Hkrati se ohranjata visoka občutljivost in diagnostična natančnost.

V večini primerov se metoda izogne \u200b\u200bdodatnim stroškom, povezanim z uporabo več protiteles, saj je rezultat zaradi redkega pojava bolezni pogosto negativen. Tehnika je zelo primerna za pregled bolnikov in je na voljo za zdravstvene ustanove različnih profilov, pa tudi za vse kategorije državljanov.

Končni rezultat analize v predlagani metodi je predstavljen v obliki odstotka eritrocitov in retikulocitov z okvaro v GPI-vezanih beljakovinah, to je klonu PNH. Tehnika omogoča ugotavljanje povečanega tveganja za nastanek trombov na podlagi odstotka identificiranega klona PNH.

Predlagana metoda je zaželena v primerjavi z nekaterimi drugimi znanimi metodami - Hemov test, test saharoze, merjenje stopnje hemolize pri različnih koncentracijah beljakovin komplementa.

Tehnični rezultat je dosežen z novo tehnologijo, ki so jo razvili avtorji za določanje PNH-klona pri paroksizmalni nočni hemoglobinuriji z uporabo pretočne citometrije, katere algoritem predvideva določitev tega klona na retikulocitih in eritrocitih (v nasprotju s standardom, določenim nevtrofilci, monociti in eritrociti). V tem primeru avtorji prvič uporabljajo kombinacijo protiteles CD235a (FITC) / CD59 (PE) / CD71 (APC). Po predlagani metodi se v času analize podatkov uporablja dodaten postopek večparametričnega zapiranja celic CD71 + in izključitev iz analize ostankov, dubletov in odstranjevanja nespecifično vezanih monoklonskih protiteles.

Ključna točka je izvedba študije retikulocitov, ki so v skladu s tehnologijo, ki so jo razvili avtorji, izolirani z uporabo protiteles proti CD71 in preučeni s kombinacijo treh monoklonskih protiteles CD235a (FITC) / CD59 (PE) / CD71 ( APC), ki so ga izbrali avtorji. Klon PNH med retikulociti odraža resnično vrednost klona PNH; avtorji so dobljene klone PNH med retikulociti primerjali z vrednostmi, pridobljenimi s standardiziranim mednarodnim pristopom k diagnozi PNH. Korelacija volumna PNH pozitivnih retikulocitov z monociti je 0,95, z granulociti - 0,93. Po predlagani metodi se odstotek PNH pozitivnih eritrocitov meri z večjo občutljivostjo v primerjavi z mednarodnim standardiziranim pristopom, ker z uporabo predlagane metode se pregleda najmanj 1.000.000 eritrocitov, po podatkih ICCS pa le 500.000.

Klon PNH smo prvič preučevali na retikulocitih s kombinacijo monoklonskih protiteles CD235a / CD71 / CD59, kar je omogočilo oceno velikosti tega klona z občutljivostjo 100%.

Posledično je postalo mogoče pregledati PNH z uporabo treh monoklonskih protiteles. Uporaba dodatne stopnje izolacije retikulocitov in "odrezovanje" celic, ki so nespecifično vezane na monoklonska protitelesa (na grafu FS vs SS, slika), daje natančen rezultat, ki na podlagi presejanja omogoča potrditev diagnoze PNH in izvedite učinkovito ustrezno zdravljenje.

Metoda se izvaja na naslednji način.

Za študijo se pacientova venska kri odvzame v epruveto z antikoagulantom K 2 EDTA. Epruveta se dostavi v laboratorij iz sobe za zdravljenje zdravstvene in profilaktične ustanove (LPU).

Za analizo eritrocitov in retikulocitov se polna kri razredči v ločeni polistirenski epruveti. Za redčenje s fiziološko raztopino, pufersko s fosfatom v razmerju 1:10, dodamo 50 μl polne krvi 450 μl fiziološke raztopine, puferirane s fosfatom, in 5 sekund temeljito mešamo na vrtincu, nato vnesemo 40 μl nastale celične suspenzije v označeno cev.

Za obarvanje vzorca se uporablja tribarvna kombinacija monoklonskih protiteles - CD235a (FITC) / CD59 (PE) / CD71 (APC). Obarvanje izvedemo tako, da vzorcu dodamo 3 μl označenih monoklonskih protiteles, nato epruveto 5 sekund stresamo na vrtincu. Nato 15 minut inkubacijo izvajamo v temi pri sobni temperaturi.

Nato krvne celice dvakrat speremo v 4 ml fiziološke raztopine, puferirane s fosfatom, v načinu centrifugiranja 5 minut s frekvenco 1500 vrt / min. Po vsakem centrifugiranju s pipeto previdno zberemo supernatant, tako da celice ostanejo na dnu epruvete.

Končni vzorec za 5 sekund resuspendiramo na vrtincu in dodamo 750 μl PBS, nakar je vzorec pripravljen za analizo na pretočnem citometru.

Nato se rezultati ocenijo in zabeležijo z večbarvno pretočno citometrijo. Analizo je mogoče izvesti na katerem koli pretočnem citometru, opremljenem z detektorji za vsaj tri fluorescenčne kanale.

Meritve se izvajajo na pretočnem citometru BD FACSCanto ™ II Becton-Dickinson (ZDA).

Ocena prisotnosti ali odsotnosti klona PNH na eritrocitih in retikulocitih ter velikost klona PNH se izvede na pretočnem citometru s posebno programsko opremo.

Za oceno klona PNH med eritrociti in retikulociti je narisan graf - FSC (log) v primerjavi s SSC (log), z uporabo logične omejitve pa je izolirano območje eritrocitov, brez ruševin in dubletov (slika 1a).

Vrata CD235a + so nato zgrajena na ploskvi FSC (log) v primerjavi s CD235a (slika 1b), s čimer se omejijo pozitivne celice in izključijo dogodki, ki niso specifično povezani s CD235a (ostanki in celice, ki ne pripadajo populaciji CD235a +).

Dogodki, vključeni v vrata CD235a +, se analizirajo na grafu CD71 proti FSC (log) (slika 1e) in identificira se pozitivna populacija CD71.

Za objektivno oceno klona PNH med retikulociti je v vratih CD71 + zbranih vsaj 20.000 dogodkov.

Glede na vrata CD71 + se nariše ploskev FSC (log) v primerjavi s SSC (log) (slika 1f), na kateri se retikulociti izolirajo z dodatnimi vrati CD71str in tako populacija dokončno očisti iz ruševin in se z zaporednimi dvojniki metoda zapiranja.

Nato je narisan graf CD235a proti CD59 (slika 1g) v primerjavi z vrati CD71str (izolirani retikulociti). V tem grafu sta poudarjeni dve področji, Norm ° Ret in PNH ° Ret (slika 1g), to sta meji normalnih oziroma PNH pozitivnih retikulocitov. Statistični podatki so izraženi v absolutnih vrednostih in% prehodov (sliki 1d in 1h).

Protokoli za zbiranje podatkov se vzpostavijo enkrat, pozneje pa so potrebne le manjše prilagoditve.

Vrata CD235a + na prvi stopnji zbiranja podatkov so zaustavitvena vrata, tj. zbira 1.000.000 dogodkov. Vrata CD235a + so bila uporabljena za graf CD235a v primerjavi s CD59 (slika 1c). Če na grafu CD235a proti CD59 ni več kot 10 dogodkov v regijah PNH tipa II in PNH tipa III, se zbiranje podatkov ustavi in \u200b\u200bsklene se, da klona PNH ni.

Z večjim številom skupnih dogodkov v teh regijah se raziskave nadaljujejo.

Klon PNH med retikulociti je odstotek retikulocitov, ki nimajo zaščitnega proteina CD59.

V prisotnosti 100% pozitivnih rezultatov na CD59 retikulocite presodijo odsotnost klona PNH in diagnosticirajo odsotnost paroksizmalne nočne bolezni hemoglobinurije.

Če je identificiran bolnik s kliničnimi simptomi negativnih CD59 retikulocitov in je vrednost dobljenih kazalcev večja od 1%, podajo diagnostični zaključek o prisotnosti klona PNH in potrdijo diagnozo paroksizmalne nočne hemoglobinurije, dodatna študija je priporočljivo v skladu z mednarodnim standardiziranim protokolom (Michael J. Borowitz, Fiona E. Craig, Joseph A. DiGiuseppe, Andrea J. Illingworth, Wendell Rosse, D. Robert Sutherland, Carl T. Wittwer, Stephen J. Richards. Smernice za diagnoza in spremljanje paroksizmalne nočne hemoglobinurije in z njo povezanih motenj s pomočjo pretočne citometrije).

Če negativno ne zaznajo nobenih CD59 retikulocitov in je vrednost dobljenih indikatorjev 0,1-1%, se presodi prisotnost manjšega klona PNH. V tem primeru je priporočljivo ponovno določiti klon PNH po 6 mesecih, da bi povečali njegovo vrednost in razvili paroksizmalno nočno hemoglobinurijo.

Ko se ta velikost klona potrdi s pretočno citometrijo v skladu z mednarodnim protokolom, se diagnosticira subklinična oblika paroksizmalne nočne hemoglobinurije brez kliničnih znakov ali pa se presodi klon PNH, sočasno z AA in MDS, po postavitvi ustreznih diagnoz v skladu s priporočili Mednarodnega Interesna skupina PNH (I-PIG).

Metoda je prestala klinična preskušanja na Oddelku za klinično laboratorijsko diagnostiko Ruske medicinske akademije za podiplomsko izobraževanje. Pregledali smo 572 bolnikov, napotenih iz različnih zdravstvenih ustanov s predhodno diagnozo ali sumom na paroksizmalno nočno hemoglobinurijo (PNH), aplastično anemijo (AA), mielodisplastični sindrom (MPS), avtoimunsko hemolitično anemijo (AIHA), starih od 12 do 82 let.

Vsi bolniki so bili podvrženi diagnostiki po predlagani metodi z uporabo metode večbarvne pretočne citometrije in po mednarodnem standardiziranem pristopu.

Ugotovljena je bila odsotnost zaščitnega proteina CD59 na membrani retikulocitov, izoliranih s CD235a (pan-eritrocitni marker) in CD71 (receptor za transferin) in dodatno očiščen z metodo zaporednih prehodov po parametrih FS / SS sipanja svetlobe. Dokazana je bila korelacija volumna klonov PNH, izmerjena med retikulociti, v skladu s predlagano metodo klonov PNH med granulociti in monociti, merjena po mednarodnem standardiziranem pristopu.

V raziskavi je sodelovalo 572 ljudi, starih od 15 do 64 let, od tega 248 moških in 324 žensk. Od 572 pregledanih je bil klon PNH odkrit pri 175 bolnikih, vrednosti pa so se gibale med 0,1% in 99,7% (mediana 41,6%). Med njimi je 78 moških in 97 žensk. Vsi bolniki so opravili vzporedne študije klona PNH v skladu z mednarodnim standardiziranim pristopom in z uporabo predlagane metode. Korelacija med vrednostjo klonov PNH med retikulociti in granulociti je bila 0,93, med retikulociti in monociti 0,95. Občutljivost metode je bila 98,9%, specifičnost 99,8%, skupna natančnost pa 99,7%.

V bistvu je pri aplastični anemiji in mielodisplastičnem sindromu klon PNH manj kot 1%. V skladu s priporočili je treba klone te velikosti preučevati v dinamiki s pogostostjo enkrat v 6 mesecih. S povečanjem velikosti klona in ustreznih kliničnih znakov govorimo o postavitvi diagnoze PNH.

Primer. Pacient M., star 34 let, je bil pod nadzorom hematologa. Po okužbi z akutnimi respiratornimi virusnimi okužbami so opazili povečanje šibkosti, zlatenice in zatemnitve urina.

Pacient je bil sprejet na oddelek zdravstvene in profilaktične ustanove (LPU) s pritožbami zaradi šibkosti in zatemnitve urina.

Na polikliničnem oddelku zdravstvene ustanove so opravili načrtni pregled. Objektivni pregled je razkril ikterus kože in vidnih sluznic. Pacient je bil sprejet na hematološki oddelek s pritožbami na splošno šibkost, slabo počutje, težko dihanje, tahikardijo, temen urin, zmanjšanje količine hemoglobina in eritrocitov.

Epruveta z vzorcem periferne krvi, stabilizirane s K 2 EDTA, je bila poslana na Oddelek za klinično laboratorijsko diagnostiko Ruske medicinske akademije za podiplomsko izobraževanje v referenčnem centru PNH, da bi s pomočjo pretočne citometrije identificirali klon PNH. Analiza klona PNH med granulociti, monociti in eritrociti je bila opravljena v skladu z mednarodnim protokolom, študija klona PNH pa s predlagano metodo na eritrocitih in retikulocitih.

Hkrati so klon PNH preučevali po mednarodnem protokolu in po predlagani metodi (ponovitev prejšnjega stavka!). V skladu z mednarodnim protokolom je bil vzorec obarvan, da bi identificiral klon PNH med granulociti, monociti in eritrociti ter po metodi, ki so jo predlagali avtorji, identificiral klon PNH med eritrociti in retikulociti. V skladu s predlagano metodo smo vzorec obarvali z monoklonskimi protitelesi proti CD235a (FITC) / CD59 (PE) / CD71 (APC), tako da smo jih izmenično dodajali 40 μL 1:10 razredčene polne krvi.

Po 15-minutni inkubaciji v temi so celice dvakrat sprali v 4 ml fiziološke raztopine, puferirane s fosfatom, v načinu centrifugiranja 5 minut s frekvenco 1500 vrt / min.

Po vsakem centrifugiranju smo odvzeli supernatant, medtem ko so celice ostale na dnu epruvete.

Pripravljeni vzorec smo 5 sekund resuspendirali na vrtincu in dodali 750 μl PBS.

Za preučevanje eritrocitov in retikulocitov je bilo na grafu FSC (log) v primerjavi s SSC (log) poudarjeno območje eritrocitov brez ostankov in dubletov.

Nato je FSC (log) v primerjavi s CD235a poudaril CD235a - pozitivne celice, razen ostankov in celic, ki niso CD235a +, ki so nespecifično vezale monoklonska protitelesa proti CD235a. Dogodki, vključeni v vrata CD235a +, so bili analizirani na grafu CD71 proti FSC (log) in ugotovljena je bila pozitivna populacija CD71.

Za objektivno oceno klona PNH med retikulociti je bilo v vratih CD71 + zbranih vsaj 20.000 dogodkov.

FSC (log) vs SSC (log) je bil izrisan glede na vrata CD71 +. Nato je bila v tem grafu izolirana populacija retikulocitov z uporabo dodatnih vrat CD71str, ki so bili tako očiščeni iz drobirja in dvojnikov z metodo zaporednega zapiranja.

Nadalje so na grafu CD235a v primerjavi s CD59, odvisno od vrat CD71str (izolirani retikulociti), retikulocite ocenili na prisotnost GPI vezanega proteina CD59 na retikulocitnih membranah, oziroma na PNH pozitivne in na PNH negativne celice. Statistični podatki so bili predstavljeni kot absolutne vrednosti in% vrat.

Z izolacijo retikulocitov s CD71 in poznejšim čiščenjem iz naplavin so celice populacije CD59 znašale 97,6%. Tako smo z uporabo predlagane metode našli klon PNH.

Študija v skladu z mednarodnim protokolom za odkrivanje PNH je potrdila, da je klon PNH prisoten na granulocitih, monocitih in eritrocitih v količini 99,2%, 97,6% oziroma 71,0%, kar kaže na obnovljivost rezultatov predlaganih in standardne metode. Ta test je služil kot osnova za diagnozo paroksizmalne nočne hemoglobinurije.

Klinična preskušanja so pokazala, da ima predlagana metoda visoko zanesljivost, natančnost in občutljivost (0,1% PNH-klon), omogoča določitev prisotnosti tako visokih vrednosti klona pri bolnikih s paroksizmalno nočno hemoglobinurijo kot manjših vrednosti (od 0,1%) pri bolnikih z aplastično anemijo, mielodisplastičnim sindromom. Predlagana tehnika je enostavna za izvedbo, ne zahteva velikih materialnih stroškov, en test traja 40-50 minut.

Tehnika je zelo primerna za pregled bolnikov in je na voljo za zdravstvene ustanove različnih profilov, pa tudi za vse kategorije državljanov.

Metoda za laboratorijsko diagnozo paroksizmalne nočne hemoglobinurije, vključno z obarvanjem pacientove celotne krvi z monoklonskimi protitelesi v fiziološki raztopini, puferirani s fosfatom, inkubacijo, izpiranjem krvnih celic iz nevezanih monoklonskih protiteles s centrifugiranjem, resuspendiranjem končnega vzorca in naknadno oceno velikosti klona ali njegova odsotnost v programu pretočnega citometra ali prisotnost zaščitnih beljakovin, označena s tem, da je tribarvna kombinacija monoklonskih protiteles CD235a (FITC) / CD59 (PE) / CD71 (APC), ki se doda v epruveto z vzorcem, za obarvanje vzorca krvi v preučevanem vzorcu se prisotnost klona PNH med eritrociti in retikulociti oceni z odsotnostjo zaščitnega proteina CD59 na membrani retikulocitov, izoliranih z vrati CD235a - markerjem pan-eritrocitov in receptorjem CD71-transferina , da se oceni klon PNH med retikulociti v vratih CD71 +, se zbere vsaj 20.000 dogodkov, odvisno od vrat CD71 + se zgradi FSC (log) graf vs SSC (log), na katerem so z dodatnimi vrati CD71str izolirani retikulociti, s čimer se s pomočjo postopnega zaporevanja očisti populacija retikulocitov iz drobirja in dvojnikov, dobljene vrednosti se primerjajo z običajnimi merili in v prisotnosti 100% pozitivnih retikulocitov na CD59 se presodi odsotnost PNH -klonira in diagnosticira odsotnost bolezni paroksizmalne nočne hemoglobinurije, če je odkrit bolnik s kliničnimi simptomi negativnih CD59 retikulocitov in je vrednost dobljenih kazalcev več kot 1 %, dajo diagnostični zaključek o prisotnosti PNH-klona in za potrditev diagnoze paroksizmalne nočne hemoglobinurije se priporoča dodatna študija v skladu z mednarodnim standardiziranim protokolom, ko se odkrije negativno za retikulocite CD59 in vrednost dobljenih indikatorjev 0,1-1%, presodi se prisotnost manjšega klona PNH in priporočljivo je po 6 mesecih ponovno določiti PNH klon, da se poveča njegova vrednost in razvije paroksizmalna intramuralna hemoglobinurija, ko se potrdi ta velikost klona, \u200b\u200bse diagnosticira subklinična oblika paroksizmalne nočne hemoglobinurije brez kliničnih znakov.

Podobni patenti:

Izum se nanaša na medicino, in sicer na oftalmologijo, in se lahko uporablja za diagnosticiranje dedne optična nevropatija (NE). Za to se izvedejo klinične in citološke študije, poleg tega pa se iz pacientove kože pridobi kultura fibroblastov z gostoto 5000-10000 celic na cm2, obarvana z mitohondrijskim fluorescenčnim barvilom TMRE, odvisnim od napetosti, do končne koncentracije 25 nM.

Izum se nanaša na medicino in opisuje kemiluminescentni reagent za določanje prisotnosti in / ali količine analita v vzorcu z ocenjeno vsebnostjo analita, pri čemer je reagent nedisperziven in topen v vodnem mediju in vsebuje vezivni partner za analit in kemiluminescentni sestavek, ki vsebuje olefinsko spojino in kovinski kelat, pri čemer je olefinska spojina spojina, ki lahko reagira z dodatkom singletnega kisika 2 + 2, da tvori dioksetan, ali ki lahko reagira s singletnim kisikom s 4 + 2 cikloaddicija z dieni in kjer je kovina ali kovinski kelat redkozemeljska kovina ali kovinska skupina VIII in kjer je kovina usklajena z dvema ali več atomi iste molekule ali kelatnega sredstva, pri čemer sta dva ali več atomov izbrana izmed skupina, ki jo sestavljajo kisik, dušik in žveplo.

Skupina izumov se nanaša na medicino, in sicer na imunologijo, in se lahko uporablja za določanje ex-vivo učinkovitosti zdravljenja raka. V ta namen se po dajanju enega ali več odmerkov imunogene sestave subjektu izmeri raven aktiviranih T-limfocitov (CD3 + CD69 +) v telesu.

Izum se nanaša na področje biotehnologije in ga lahko uporabimo za določanje človeškega genotipa s polimorfizmom v genski matriki metaloproteinaze MMP9-1562 C\u003e T (rs3918242).

Izum se nanaša na metodo za določanje biološke aktivnosti embrionalnih jajčec Trichuris. Opisana metoda vključuje izvedbo vsaj 3 analiz, izbranih med: - oceno in / ali potrditvijo stopnje razvoja zarodkov s pomočjo kvantitativne metode PCR z uporabo ustreznih markerskih zaporedij za določanje števila kopij genomske DNA, embrionalna jajčeca z biokemijskimi in / ali molekularno biološkimi metodami, - ovrednotenje induktivnosti izražanja genov v embrionalnih jajcih, - vrednotenje gibljivosti ličink Trichurs z mikroskopom za daljša obdobja opazovanja po predinkubaciji pri povišanih temperaturah in / ali stopnja ličink Trichuris v laboratorijski živali ...

Izum se nanaša na medicino, in sicer na kardiologijo, in se lahko uporablja za napovedovanje tveganja srčno-žilne smrtnosti pri bolnikih s postinfarktnim kroničnim srčnim popuščanjem v kombinaciji z sladkorna bolezen 2 vrsti.

Izum se nanaša na medicino, in sicer na onkologijo in klinično biokemijo. Bistvo metode je, da fiksirane celice periferne krvi obdelujemo s primarnimi protitelesi na estrogensko vezavni protein, ki specifično sodelujejo z antigeni na površini segmentiranih granulocitov, nato pa nastalim kompleksom antigen-protiteles dodajo sekundarna protitelesa s fluorescentno označenimi protitelesi , in ob prisotnosti obarvanja površine segmentiranih granulocitov diagnosticirajo granulocite maligne novotvorbein v odsotnosti obarvanja površine segmentiranih granulocitov diagnosticirajo benigne novotvorbe.

Izum se nanaša na medicino, in sicer na onkologijo, in se lahko uporablja za napovedovanje razvoja hematogenih metastaz po kombiniranem zdravljenju raka ledvic.

Izum se nanaša na medicino, in sicer na porodništvo in ginekologijo, in se lahko uporablja za napovedovanje zaviranja intrauterine rasti ploda. Za to se v venski krvi ženske v zgodnji nosečnosti določi relativna vsebnost CD3 + CD16 + 56 + limfocitov, raven komponente C3 komplementa in topni receptor faktorja tumorske nekroze (sTNF-R).

Izum se nanaša na medicino, in sicer na gastroenterologijo, in se lahko uporablja za diagnozo suppurativne postnekrotične psevdociste trebušne slinavke. V ta namen se aktivnost fagocitov v bolnikovi krvi določi s stopnjo izraženosti CD 14 + / HLA-DR + s pomočjo pretočne citometrije in statistične analize ROC. Če je vsebnost CD14 + / HLA-DR + pod 85%, se diagnosticira suppurativna postnekrotična psevdocista trebušne slinavke. Uporaba te metode omogoča diagnosticiranje suppurativne postnekrotične psevdociste trebušne slinavke, kar omogoča določitev taktike vodenja takšnih bolnikov in izbiro kirurškega posega. 2 ex, 1 tabela

Izum se nanaša na medicino, in sicer na hematološko onkologijo, z njo pa lahko napovemo razvoj preživetja brez ponovitve bolezni pri bolnikih z multiplim mielomom po avtologni presaditvi krvotvornih matičnih celic. Cilj izuma je poenostaviti postopek za napovedovanje preživetja brez bolezni pri bolnikih z multiplim mielomom po ATHSC. Metoda za napovedovanje preživetja brez ponovitve bolezni pri bolnikih z multiplim mielomom po avtologni presaditvi hematopoetskih matičnih celic (ATHSC) vključuje pretočno citometrijo in oceno relativne vsebnosti ene od populacij limfocitov z uporabo njene mejne vrednosti. Pri predlagani metodi se po postopku afereze pred presaditvijo v pacientovem produktu za aferezo določi relativno število celic CD45 + CD19 + B in če je vsebnost celic CD45 + CD19 + B več kot 2,5%, krajše napoveduje se obdobje preživetja brez ponovitve bolezni po ATHSC in z vsebnostjo CD45 + CD19 + B celic manj kot 2,5% napoveduje daljše preživetje brez bolezni po ATHSC. 1 bolnik

Izum se nanaša na medicino, in sicer na imunologijo, in se lahko uporablja za oceno reakcije blastne transformacije limfocitov. Za to se brucelin uporablja za specifično aktivacijo limfocitov. Odkrivanje blastnih oblik limfocitov se izvede z uporabo monoklonskih protiteles proti CD34, čemur sledi štetje celic s pretočno citometrijo. Uporaba te metode omogoča upoštevanje aktiviranih z brucelinom limfocitov v RBTL z uporabo monoklonskih protiteles CD34 pri bolnikih z brucelozo in zdravimi darovalci. 1 zavihek.

Izum se nanaša na medicino, in sicer na imunologijo, in se lahko uporablja za določanje protiteles proti alogenskemu HLA-G v krvnem serumu. Za to se uporablja test navzkrižnega ujemanja darovalcev mononuklearnih celic s prejemnikovim serumom. Subpopulacije mononuklearnih celic se analizirajo s pomočjo pretočne citofluorometrije za vezavo monoklonskih protiteles HLA-G, stopnja izraženosti HLA-G pa se oceni na eksperimentalnih in kontrolnih darovalnih mononuklearnih celicah. Hkrati sta pomembni subpopulaciji CD3-HLA-G + in CD3 + HLA-G +, po katerih se koeficient supresije (CP) v eksperimentalni nastavitvi izračuna glede na kontrolni po formuli: CP HLA-G \u003d (HLA - G О П - HLA - G K ON T) HLA - GK ON T × 100, kjer je HLA-Gon skupno relativno število subpopulacij, ki izražajo HLA-G: (CD3-HLA-G ++ CD3 + HLA-G +) v poskusnem okolju,%; HLA-Gcont je skupno relativno število subpopulacij, ki izražajo HLA-G: (CD3-HLA-G ++ CD3 + HLA-G +) v nastavitvi nadzora,%. V tem primeru je prisotnost preobčutljivosti na alogenski HLA-G diagnosticirana z negativno vrednostjo CPHLA-G. Uporaba te metode omogoča odkrivanje alogenske preobčutljivosti na HLA-G s pomočjo pretočne citometrije in določanje subpopulacij CD3-HLA-G + in CD3 + HLA-G +. 3 pr., 3 dwg., 2 tbl.

Izum se nanaša na medicino, in sicer na porodništvo in ginekologijo, in se lahko uporablja za napovedovanje ponovitve ogroženega splava. V ta namen se pri ženskah z grožnjo splava v 7-12 tednih nosečnosti opravi imunološka študija periferne venske krvi. Po zdravljenju nevarnosti prekinitve nosečnosti se določi relativna vsebnost CD45RA-CD62L- v populaciji limfocitov CD8 +. Če je njegova vrednost večja od 23,9%, napovedujejo pojav nevarnega splava v drugem trimesečju pri ženskah z anamnezo ponavljajočih se splavov. Uporaba te metode omogoča napovedovanje ponovitve ogroženega splava v drugem trimesečju nosečnosti, kar bo omogočilo izbiro pravilne taktike vodenja nosečnice in zmanjšanje pogostosti tega zapleta. 1 tbl, 4 pr

Izum se nanaša na medicino, in sicer na transfuziologijo, in se lahko uporablja za nadzor učinkovitosti obsevanja donatorske krvi. Metoda vključuje uprizoritev reakcije blastne transformacije krvnih celic z mitogenim fitohemaglutininom in upoštevanje rezultatov reakcije z določitvijo indeksa stimulacije limfocitov. Reakcijo izvedemo glede na obsevano darovalno kri, rezultate zabeležimo s pretočnim citometrom z uporabo monoklonskih protiteles, označenih z različnimi fluorokromi, zapiranje aktiviranih limfocitov z zmanjšano ekspresijo splošnega levkocitnega markerja CD45 in določitev med njimi odstotka dvojno negativnih T-limfociti z imunofenotipom CD3 CD4-CD8-, medtem ko se za kontrolo vzame neobsevan vzorec iste krvi. Po tem se učinkovitost obsevanja določi z razmerjem vsebnosti dvojno negativnih T-limfocitov z imunofenotipom CD3 + CD4-CD8- v testirani obsevani in isti neobsevani kontrolni krvi kot Eob \u003d Cdntlo-Sdntlk, kjer je Eob je učinkovitost obsevanja, Cdntlo je odstotek dvojno negativnih T-limfocitov z CD3 + CD4-CD8- imunofenotipom v poskusu (v testirani obsevani krvi), Sdntlc - odstotek vsebnosti dvojno negativnih T- limfociti z CD3 + CD4-CD8- imunofenotipom v kontroli (v neobsevanem vzorcu iste krvi). Če je razlika s kontrolo večja od 50%, se sklene o funkcionalni manjvrednosti T-limfocitov v obsevani krvi in \u200b\u200bimunološki varnosti tega krvnega pripravka za prejemnika. Uporaba te metode omogoča določanje učinkovitosti obsevanja krvi darovalca s pretočno citometrijo.

Izum se nanaša na medicino, in sicer na porodništvo in ginekologijo, ter omogoča napovedovanje grozečega poznega splava pri nosečnicah. Za to se v obdobju 5-12 gestacijskih tednov določi relativno število gestacijskih monocitov CD178 + v periferni venski krvi. Če je njegova vrednost v monocitnih vratih enaka 37,7% ali manj, se pri ženskah z grožnjo prekinitve nosečnosti napoveduje grožnja splava zgodnji zmenki in zgodovina ponavljajočih se splavov. Uporaba te metode vam omogoča, da izberete pravilno taktiko vodenja nosečnosti, izvedete kompleks terapevtskih in profilaktičnih ukrepov ter zmanjšate tveganje za zaplete in neugodne izide nosečnosti pri skupini žensk z velikim tveganjem za splav. 3 ex, 1 tabela

Izum se nanaša na medicino, in sicer na porodništvo, in zadeva izbiro taktike za vodenje nosečnic s placentno insuficienco in sindromom zaviranja rasti ploda (FGRS). V ta namen se pri bolnikih s fetoplacentno insuficienco in IGR v krvnem serumu z encimskim imunološkim testom ugotovi aktivnost superoksid dismutaze, vsebnost rastnega faktorja posteljice, endoglina in melatonina. Za te kazalnike se napovedni koeficient P izračuna po formuli: P \u003d (0,0001 * COD + 0,0255 * Mel + 0,1636 * CD105 + (- 0,0487 * PGF) -8,5389, kjer je KPK superoksid dismutaza, pg / ml, Mel - melatonin, pg / ml, CD 105 - endoglin, pg / ml, PGF - rastni faktor posteljice, pg / ml. Pri vrednosti P 0,64 ali več se napoveduje veliko tveganje za razvoj kritičnega stanja ploda v predporodnem obdobju, ki zahteva dokončanje nosečnosti s kirurškim posegom carski rez v nujnem primeru v interesu ploda. Metoda omogoča večjo natančnost napovedovanja kritičnega stanja ploda pred rojstvom, kar omogoča pravočasno izbiro ustrezne taktike za vodenje pacienta. 2 ex.

Izum se nanaša na medicino, in sicer na otolaringologijo, in se lahko uporablja za diferencialno ekspresno diagnostiko akutnega virusnega in bakterijskega tonzilitisa pri odraslih. Za to se odvzame periferna kri in določi relativna vsebnost subpopulacij nevtrofilnih granulocitov, ki hkrati izražajo CD16, CD11b na površinski membrani. Prisotnost subpopulacije CD16brightCD11bdimNG% od 80 do 99,9% z visoko gostoto izražanja CD16 in nizko gostoto izražanja CD11b se šteje za normalno. Če se odkrije subpopulacija CD16brightCD11bbrightNG ali CD16dimCD11bbrightNG v količini 40% ali več, akutna virusna okužba ali akutna bakterijska okužba... Uporaba te metode vam omogoča, da zagotovite natančnost diferencialna diagnoza akutni virusni in bakterijski tonzilitis pri odraslih. 3 ex, 1 tabela

Skupina izumov se nanaša na medicino, in sicer na laboratorijsko diagnostiko, in se lahko uporablja za sočasno odkrivanje predstavnikov pogojnih taksonomskih skupin mikroorganizmov, patogenih za ljudi in živali. Zanj je značilna uporaba vsaj petih imunokromatografskih trakastih testov, nameščenih v enem telesu. Hkrati so v prvem in drugem kanalu telesa naprave trakasti testi za odkrivanje toksinov, v tretjem kanalu - trakasti test za odkrivanje vegetativnih oblik bakterij, v četrtem - za spore oblike bakterij in v peti kanal - trak test za identifikacijo gojišča za gojenje virusov in rikecije. Testiranje se izvede tako, da se telo testov imunokromatografskih trakov položi v toplotno izolacijsko ceflenovo vrečko, sestavljeno iz dveh slojev ceflena, s toplotno izolacijskim tesnilom iz poroznega toplotnoizolacijskega materiala in telo testov imunokromatografskih trakov notranjost vrečke se ogreva s konstantnim virom toplote, odprtina vrečke pa se zapre z mehansko objemko in šteje ta trenutek za začetek testiranja. Predlaga se tudi naprava za imunokromatografsko analizo. Učinek: skupina izumov omogoča povečanje produktivnosti imunokromatografske analize, razširitev temperaturnega območja imunokromatografske analize z minus 20 na plus 50 ° C, skrajšanje časa pridobivanja rezultata na 10 minut v primerjavi z analizo pri sobni temperaturi ( 20 min), če se doseže enaka občutljivost, da se poveča občutljivost analize v primerjavi z analizo, izvedeno pri sobni temperaturi. 2. št. in 7 p.p. f-kristali, 5 dwg., 4 tbl., 8 pr.

Izum se nanaša na medicino, in sicer na laboratorijsko diagnostiko, in se lahko uporablja za diagnosticiranje paroksizmalne nočne hemoglobinurije. V ta namen preiskovani vzorec krvi obarvamo z monoklonskimi protitelesi CD235a CD59CD71. Prisotnost klona PNH med eritrociti in retikulociti se oceni z odsotnostjo zaščitnega proteina CD59 na membrani retikulocitov, izoliranih z vrati CD235a, markerjem pan-eritrocitov in receptorjem za CD71 transferin. Za oceno klona PNH med retikulociti se v vratih CD71 + zbere vsaj 20.000 dogodkov, odvisno od vrat CD71 + se nariše graf FSC proti SSC, na katerem se retikulociti izolirajo z dodatnimi vrati CD71str, s čimer se očisti retikulocit populacije iz ruševin in dvojnic po metodi zaporednih vrat. V prisotnosti 100 CD59 pozitivnih retikulocitov se presodi odsotnost klona PNH in diagnosticira odsotnost paroksizmalne nočne hemoglobinurije. Če se odkrije bolnik s kliničnimi simptomi negativnih CD59 retikulocitov in je vrednost dobljenih indikatorjev večja od 1, se opravi diagnostični zaključek o prisotnosti klona PNH in se v skladu z mednarodnim standardiziranim protokolom za potrditev priporoči dodatna študija diagnoza paroksizmalne nočne hemoglobinurije. Pri odkrivanju negativnega za CD59 retikulocitov in vrednosti dobljenih kazalcev 0,1-1 se presodi prisotnost manjšega PNH-klona in priporočljivo je po 6 mesecih ponovno določiti PNH-klon za povečanje njegove vrednosti in razvoj paroksizmalne nočne hemoglobinurije in po potrditvi te velikosti klona diagnosticiramo subklinično obliko paroksizmalne nočne hemoglobinurije brez kliničnih znakov. Uporaba večparametrskega zapiranja celic CD71 + omogoča, da iz analize izključimo ostanke, dublete in nespecifično vezana monoklonska protitelesa. 1 bolnik

Paroksizmalna nočna hemoglobinurija (PNH) je pridobljena bolezen, ki se kaže v stalni hemolitični anemiji, paroksizmalni ali vztrajni hemoglobinuriji in intravaskularni hemolizi. Za redkost te vrste hemolitične anemije je značilno, da 1 od pol milijona ljudi trpi za PNH, večinoma mladi.

Vzroki bolezni trenutno še niso znani. Predpostavlja se, da se pojavi zaradi pojava nenormalnega klona rdečih krvnih celic, ki je nagnjen k intravaskularni hemolizi. Manjvrednost eritrocitov je posledica strukturnih in biokemijskih napak v njihovi membrani. Znano je, da se v okvarjeni membrani aktivira peroksidacija lipidov, kar prispeva k zgodnji lizi eritrocitov, poleg tega pa v patološki proces sodelujejo nenormalni kloni granulocitov in trombocitov. Glavna vloga pri nastanku trombotičnih zapletov PNH pripada intravaskularnemu uničenju eritrocitov in sprožitvi koagulacije krvi z dejavniki, sproščenimi v tem primeru. PNH se praviloma začne postopoma in kronično nadaljuje s periodičnimi krizami. Krize izzovejo virusne okužbe, kirurški posegi, psiho-čustveni stres, menstruacija, uporaba števil drog in živilskih izdelkov.

Simptomi paroksizmalne nočne hemoglobinurije

Simptomi PNH med krizo:

• paroksizmalna bolečina v trebušna votlina;
• bolečine v ledvenem predelu;
• ikterus kožo in beločnice; hipertermija; pastozni obraz;
• črna obarvanost urina, predvsem ponoči;
• močno znižanje krvnega tlaka;
• prehodno povečanje vranice;
• prenehanje pretoka urina.

V nekaterih primerih je hemolitična kriza usodna.

Simptomi PNH zunaj krize:

• splošna šibkost;
• bleda, z ikteričnim odtenkom, barva kože;
• anemija;
• nagnjenost k nastanku trombov; hematurija; povečala arterijski tlak; povečana jetra; dispneja; palpitacije; pogoste nalezljive bolezni.

Diagnostika

• Krvni test: anemija (normokromna, kasneje hipohromna), zmerna levkocito- in trombocitopenija, raven serumskega železa se znatno zmanjša.
• Pregled urina: črno obarvanje, hemoglobinurija, hemosiderinurija, proteinurija. Gregersenov test benzidina v urinu je pozitiven.
• Hamov specifični test je pozitiven.
• Hartmannov specifični test je pozitiven.
• Ločila kostni mozeg: hiperplazija rdečega krvotvornega zarodka, v hujših primerih pa lahko opazimo tudi hipoplazijo kostnega mozga, povečanje količine maščobnega tkiva v kostnem mozgu.

Zdravljenje paroksizmalne nočne hemoglobinurije

Zdravljenje PNH je simptomatsko in je v glavnem sestavljeno iz nadomestnih transfuzij krvi, katerih obseg in pogostost sta odvisna od "odziva" na te ukrepe. Pri zdravljenju PNH se metandrostenolon uporablja v odmerku 30-50 mg / dan vsaj 2-3 mesece. Boj proti hipoplaziji kostnega mozga poteka z intravensko uporabo antitimocitnega imunoglobulina v odmerku 150 mg / dan, 4 do 10 dni. Priporočljivo je jemati železove pripravke per os v majhnih odmerkih. Včasih dober učinek dajejo velike odmerke kortikosteroidov. Hipoplazija kostnega mozga z razvojem trombotičnih zapletov je indikacija za njegovo presaditev. Opisani so bili posamezni primeri okrevanja od PNH, v nekaterih primerih je trajanje ugodnega poteka bolezni več desetletij.

Bistvena zdravila

Obstajajo kontraindikacije. Potrebno je posvetovanje s specialistom.

RCHD (Republikanski center za razvoj zdravstvenega varstva Ministrstva za zdravje Republike Kazahstan)
Različica: Klinični protokoli MZ RK - 2015

Paroksizmalna nočna hemoglobinurija [markaafava-mikeli] (D59.5)

Onkohematologija

splošne informacije

Kratek opis

Priporočeno
Strokovni svet
RSE na REM "Republikanski center
razvoj zdravja "
Ministrstvo za zdravje
in družbeni razvoj
Republika Kazahstan
z dne 9. julija 2015
Protokol št. 6

Razvrstitev

Klinična klasifikacija:

Obstajajo 3 glavne oblike APG.
1. Klasična oblikaza katero so značilni klinični in laboratorijski znaki intravaskularne hemolize brez znakov drugih bolezni, povezanih z odpovedjo kostnega mozga (aplastična anemija (AA), mielodisplastični sindrom (MDS), idiopatska mielofibroza).
2. PNH, diagnosticiran pri bolnikih z AA (AA / PNG),MDS (MDS / APG)in zelo redko z mielofibrozo (idiopatska mielofibroza / PNH),kadar imajo te bolezni klinične in / ali laboratorijske znake intravaskularne hemolize in se v periferni krvi določi celični klon s fenotipom PNH.
3. Subklinična oblikabolezni ( AA / cPNG, MDS / cPNG, idiopatska mielofibroza / cPNG), diagnosticiran pri bolnikih brez kliničnih in laboratorijskih znakov hemolize, vendar v prisotnosti manjšega klona celic s fenotipom PNH (običajno<1 %). Следует отметить, что субклиническое течение ПНГ может отмечаться и при большем размере клона.

Izolacija subklinične oblike PNH nima neodvisnega kliničnega pomena, vendar je treba zagotoviti spremljanje takšnih bolnikov v povezavi z verjetnostjo povečanja velikosti klona in napredovanja hemolize, ki lahko prevladuje med kliničnimi manifestacijami in zahteva ustrezno terapijo.
Ob upoštevanju, da subklinična oblika PNH pri AA in / ali MDS nima neodvisnega kliničnega pomena.

Klasična oblika APG.
Pri bolnikih s klasičnim PNH praviloma opazimo izrazito intravaskularno hemolizo s povečanjem ravni laktat dehidrogenaze (LDH) v krvnem serumu, retikulocitozo in znižanjem ravni haptoglobina. V tej različici PNH ni dokončnih morfoloških znakov drugih patologij kostnega mozga (AA, MDS, mielofibroza) in ni nobenih kariotipskih nepravilnosti

PNH v ozadju sindromov insuficience kostnega mozga (AA / PNH, MDS / PNH).
Bolnikom z AA / PNH in MDS / PNH diagnosticirajo klinične in laboratorijske znake intravaskularne hemolize. Na različnih stopnjah razvoja bolezni lahko prevladajo simptomi odpovedi kostnega mozga ali intravaskularne hemolize, v nekaterih primerih pa je kombinacija le-teh. Kljub temu, da pri bolnikih z majhnim klonom PNH bolezen običajno poteka z minimalnimi simptomi in so opaženi le laboratorijski znaki intravaskularne hemolize, je potrebno spremljanje (2-krat na leto). To je posledica dejstva, da je sčasoma možna ekspanzija klona z razvojem hude hemolize in velikim tveganjem za trombotične zaplete.

Subklinična oblika APG (AA / sPNG, MDS / sPNG).
Bolniki s subklinično PNH nimajo nobenih kliničnih ali laboratorijskih dokazov hemolize. Majhne populacije celic, ki jim primanjkuje GPIAP, je mogoče zaznati le z visoko občutljivo pretočno citometrijo. Subklinični PNH je mogoče diagnosticirati na podlagi bolezni, za katere je značilna disfunkcija kostnega mozga, predvsem AA in MDS. Zelo pomembno je, da te bolnike skrbno spremljamo, da bi odkrili znake hemolize in ekspanzije klonov, saj je 15-17% bolnikov z AA / subkliničnim PNH sčasoma se razvije hemolitična oblika AA / PNH.

Diagnostika

Seznam osnovnih in dodatnih diagnostičnih ukrepov:
Osnovni (obvezni) diagnostični pregledi, ki se izvajajo na ambulantni ravni:
Splošni krvni test (štetje retikulocitov v razmazu);
· Imunofenotipizacija periferne krvi za določanje odstotka PNH v eritrocitih tipov I, II in III s pomočjo pretočne citometrije;
· Biokemični krvni test (skupni bilirubin, neposredni bilirubin, LDH);
· Test Coombsa;
· Mielogram.

Dodatni diagnostični pregledi, opravljeni na ambulantni ravni:



· Določanje koncentracije folne kisline in vitamina B12;
· Koagulogram;
· Standardni citogenetski pregled kostnega mozga;
· Splošna analiza urina
ELISA za označevalce virusnega hepatitisa;
· ELISA za označevalce HIV;
· ELISA za označevalce virusov iz skupine herpesa;
· HLA - tipkanje;
EKG;
· Ultrazvok trebušnih organov (jetra, vranica, trebušna slinavka, žolčnik, bezgavke, ledvice, pri ženskah - majhna medenica;

Minimalni seznam pregledov, ki jih je treba opraviti, ko gre za načrtovano hospitalizacijo:
Splošni krvni test (štetje levkoformule, trombocitov in retikulocitov v razmazu);
Mielogram;
Krvna skupina in rezus faktor
· Biokemijski krvni test (skupni protein, albumin, skupni bilirubin, neposredni bilirubin, kreatinin, sečnina, ALaT, ASaT, GGTP, glukoza, LDH, C-reaktivni protein, alkalna fosfataza);
· Test Coombsa;
· Ultrazvok trebušne votline in vranice;
· Ultrazvok medeničnih organov - za ženske.

Osnovni (obvezni) diagnostični pregledi, ki se izvajajo na stacionarni ravni:

Splošni krvni test (štetje levkoformule, trombocitov in retikulocitov v razmazu);
- imunofenotipizacija periferne krvi za določanje odstotka PNH v eritrocitih tipov I, II in III s pomočjo pretočne citometrije;
- biokemični krvni test (skupni bilirubin, neposredni bilirubin, LDH);
- Coombsov test
- mielogram.
- standardni citogenetski pregled kostnega mozga;
- ELISA za označevalce virusnega hepatitisa;
- ELISA za označevalce HIV;
- ELISA za označevalce virusov herpesa;
· RTG organov prsnega koša.
Dodatni diagnostični pregledi, opravljeni na stacionarni ravni:
· Določanje ravni haptoglobina.
· Krvna skupina in Rh faktor;
· Biokemijski krvni test (skupni protein, albumin, skupni bilirubin, neposredni bilirubin, kreatinin, sečnina, ALaT, ASaT, glukoza, LDH, GGTP, C-reaktivni protein, alkalna fosfataza);
· Metabolizem železa (določanje ravni serumskega železa, skupne sposobnosti vezave železa v serumu in ravni feritina);
· Določanje koncentracije folne kisline in vitamina B12;
· Koagulogram;
· HLA - tipkanje;
· Splošna analiza urina;
· Določanje ravni hemosiderina v urinu;
· Test Reberg-Tareev (določanje hitrosti glomerulne filtracije);
EKG;
· Ultrazvok trebušnih organov (jetra, vranica, trebušna slinavka, žolčnik, bezgavke, ledvice, pri ženskah - majhna medenica;
· Rentgensko slikanje prsnega koša;
· USDG arterij in ven;
· Ehokardiografija;
EGDS (razširitev žil požiralnika);
· Vsakodnevno spremljanje krvnega tlaka;
· 24-urno spremljanje EKG.

Diagnostični ukrepi, opravljeni v fazi nujne medicinske pomoči:
· Zbiranje pritožb in anamneza bolezni;
· Zdravniški pregled.

Diagnostična merila za diagnozo:

Pritožbe in anamneza:
- šibkost;
- hitra utrujenost;


- povečana krvavitev.

Anamneza: bodite pozorni na:
- dolgoročna šibkost;
- hitra utrujenost;
- pogoste nalezljive bolezni;
- akutni napadi bolečine v ledvenem predelu;
- zatemnitev urina, predvsem ponoči in zjutraj;
- Budd-Chiarijev sindrom (tromboza jetrnih ven);
- tromboza različnih lokalizacij;
- povečana krvavitev;
- pojav hemoragičnih izpuščajev na koži in sluznicah;
- ambulantno računovodstvo AA ali MDS.

Zdravniški pregled[ 8 ]:
- kombinacija bledice in rumenkaste kože;
- hemoragični izpuščaji - petehije, ekhimoza različnih lokalizacij;
težko dihanje;
- tahikardija;
- povečana jetra;
- povečana vranica.

Laboratorijske raziskave:
Če sumimo na PNH, pretočna citometrija daje natančno diagnozo. Pretočna citometrija je najbolj občutljiva in informativna metoda.
· Splošna analiza krvi:Število retikulocitov je običajno povečano, eritrociti pa se morfološko ne razlikujejo od norme glede na bris periferne krvi. Kot rezultat hemolize so v krvi pogosto prisotni normoblasti, opazimo polikromatofilijo. Zaradi velikih izgub železa v urinu pri bolnikih s PNH obstaja velika verjetnost, da se razvije pomanjkanje železa, nato pa eritrociti dobijo videz, značilen za IDA - hipokromen s težnjo k mikrocitozi. Število levkocitov in trombocitov je pogosto zmanjšana. Opazimo lahko tudi pancitopenijo različne resnosti. V nasprotju z aplastično anemijo pa se retikulocitoza običajno pojavi skupaj s citopenijo.
· Kemija krvi:V krvnem serumu se poveča količina bilirubina, prostega hemoglobina in methemoglobina. Obstajajo znaki intravaskularne hemolize, to je zmanjšanje ali odsotnost haptoglobina, povečanje LDH, povečana raven prostega hemoglobina in železa v urinu. Nizke ravni haptoglobina stalno opažamo pri intravaskularni hemolizi, pojavljajo pa se tudi v primerih ekstravaskularne hemolize, zlasti kronične. Ker je haptoglobin tudi reagent v akutni fazi, je najbolj informativno njegovo močno zmanjšanje ali odsotnost.
· V urinu:lahko določimo hematurijo in proteinurijo. Hemosiderinurija in odkrivanje krvnega detritusa v urinu sta stalna znaka diagnostične vrednosti.
· Morfološke raziskave:V kostnem mozgu se zazna hiperplazija eritroidov. Pogosto se določi hipoplazija kostnega mozga, zmanjšana vsebnost siderocitov in sideroblastov.
· Imunofenotipizacija: Zgodnji in zanesljiv pokazatelj fenotipa PNH je izražanje proteinov, vezanih na GPI: ekspresija CD14 in CD48 se določi na monocitih, CD16 in CD66b - na granulocitih, CD48 in CD52 - na limfocitih, CD55 in CD59 - na eritrocitih, CD55, CD58.

Instrumentalne raziskave:
· Ultrazvok trebušnih organov: povečanje velikosti jeter, vranice.
· Doppler ultrazvok arterij in ven:prisotnost tromboze arterij in ven
· EKG: kršitev prevodnosti impulzov v srčni mišici.
· EchoCG:znaki srčnega popuščanja (EF<60%), снижение сократимости, диастолическая дисфункция, легочная гипертензия, пороки и регургитации клапанов.
· CT / MRI celotnega telesa:odkrivanje tromboze (možganska, portalna itd.)
· CT skeniranje prsnega segmenta:infiltracijske spremembe v pljučnem tkivu, znaki pljučne hipertenzije.
· FGDS: krčne žile požiralnika.
· Spirografija: testiranje pljučne funkcije.

Indikacije za posvetovanje ozkih strokovnjakov:
· Zdravnik za endovaskularno diagnostiko in zdravljenje - namestitev centralnega venskega katetra s perifernega dostopa (PICC);
· Hepatolog - za diagnozo in zdravljenje virusnega hepatitisa;
· Ginekolog - nosečnost, metroragija, menoragija, posvetovanje pri predpisovanju kombiniranih peroralnih kontraceptivov;
Dermatovenerolog - kožni sindrom
· Specialist infekcijske bolezni - sum na virusne okužbe;
· Kardiolog - nenadzorovana hipertenzija, kronično srčno popuščanje, srčni ritem in motnje prevodnosti;
· Nevrološka akutna cerebrovaskularna nesreča, meningitis, encefalitis, nevroleukemija;
· Nevrokirurg - akutna motnja cerebralne cirkulacije, sindrom dislokacije;
· Nefrolog (eferentolog) - odpoved ledvic;
· Onkolog - sum na solidne tumorje;
Otorinolaringolog - za diagnozo in zdravljenje vnetnih bolezni obnosnih votlin in srednjega ušesa;
Oftalmolog - okvara vida, vnetne bolezni očesa in dodatkov;
· Proktolog - analna razpoka, paraproktitis;
• psihiater - psihoza;
· Psiholog - depresija, anoreksija itd .;
· Specialist intenzivne nege - zdravljenje hude sepse, septičnega šoka, sindroma akutne pljučne poškodbe z diferenciacijskim sindromom in terminalnimi stanji, namestitev centralnih venskih katetrov.
· Revmatolog - Sweetov sindrom;
· Torakalni kirurg - eksudativni plevritis, pnevmotoraks, pljučna zigomikoza;
· Transfuziolog - za izbiro transfuzijskih medijev s pozitivnim posrednim testom antiglobulina, neučinkovitost transfuzij, akutna masivna izguba krvi;
Urolog - nalezljive in vnetne bolezni sečil;
· Ftiziatrik - sum na tuberkulozo;
· Kirurg - kirurški zapleti (nalezljivi, hemoragični);
· Maksilofacialni kirurg - nalezljive in vnetne bolezni zobno-čeljustnega sistema.

Diferencialna diagnoza

Diferencialna diagnoza.
Diferencialna diagnoza se izvaja z drugimi vrstami hemolitičnih anemij in s citopeničnim PNH - z aplastično anemijo.

Anemija pomanjkanja B-12.Pogosto je potrebna diferencialna diagnoza PNH, ki se pojavlja s pancitopenijo in hemolizo, z anemijo pomanjkanja B12 s hemolitičnim sindromom. Pri obeh teh boleznih je hemoliza precej izrazita. Razlike med temi boleznimi so predstavljene v tabeli:

Tabela. Diferencialne diagnostične razlike med anemijo pomanjkanja B12 in PNH.

Zdravljenje

Cilji zdravljenja:
Doseganje in vzdrževanje remisije (glej točko 15 - Kazalniki učinkovitosti zdravljenja).

Taktika zdravljenja:
Zdravljenje brez zdravil:
Način II:splošna zaščita.
Prehrana:Bolnikom z nevtropenijo ni priporočljivo upoštevati posebne prehrane ( stopnja dokazov B).

Zdravljenje.
Splošni algoritem za zdravljenje bolnikov s PNH, odvisno od oblike bolezni in resnosti hemolize, je prikazan na sliki.

Algoritem za zdravljenje bolnikov s PNH.


Zdravljenje z eklizumabom.
Ekulizumab je humanizirano monoklonsko protitelo, ki se veže na komponento C5 komplementa. To preprečuje cepitev C5 na C5a in C5b in s tem zavira tvorbo provnetnih citokinov (preko C5a) in MAC (preko C5b).
Trenutno obstaja ena multicentrična, randomizirana, dvojno slepa, s placebom nadzorovana študija TRIUMPH, ki je ocenila učinkovitost ekulizumaba pri stabilizaciji ravni hemoglobina in zmanjšanju odvisnosti od transfuzije pri 87 bolnikih s transfuzijsko odvisnimi PNH v 6 mesecih zdravljenja.
Študija je vključevala bolnike, starejše od 18 let, ki so bili v zadnjem letu podvrženi vsaj 4 transfuzijam medijev, ki vsebujejo eritrocite, s klonom PNH eritrocitov tipa III vsaj 10%, ravni trombocitov vsaj 100 tisoč / μL, povečanjem LDH ³1,5 normalno. Vsi bolniki so pred začetkom zdravljenja prejeli cepivo proti meningokokom.
Glavni rezultat študije je bila stabilizacija ravni hemoglobina pri 49% bolnikov, ki so prejemali ekulizumab (str<0,001) и снижение необходимости в трансфузиях в этой группе до нуля (в группе плацебо за 6 месяцев потребовалось от 6 до 16 трансфузий), а также улучшение качества жизни.
Rezultati te študije so bili podlaga za odobritev uporabe ekulizumaba v FDA pri transfuzijsko odvisnem PNH s hemolizo.
Raziskave R. Hillmen in sod. in nadaljnje prospektivne študije imajo nekatere omejitve, ki otežujejo ekstrapolacijo njegovih rezultatov na vse bolnike s PNH, kar je podrobno opisano v poročilu FDA in Cochraneovem pregledu Artura J Martí-Carvajala:
· Učinkovitost so raziskovali samo pri bolnikih, starejših od 18 let;
· Podatki o starejših bolnikih so prav tako omejeni (le 15 bolnikov v študiji je bilo starejših od 65 let);
· Študija je vključevala samo transfuzijsko odvisne bolnike s hemolizo;
· Majhno število bolnikov s trombotičnimi epizodami, velika pogostnost predpisovanja antikoagulantne profilakse ne omogoča ocene učinka ekulizumaba na tveganje trombotičnih zapletov in priporoča prenehanje uporabe antikoagulantov pri bolnikih, ki prejemajo ekulizumab. Relativno zmanjšanje incidence trombotičnih epizod glede na antikoagulantno profilakso in zdravljenje z ekulizumabom je 81%;
· Uporabljeni vprašalnik o kakovosti življenja ni bil potrjen za bolnike s PNH, izboljšanje kakovosti življenja pa je lahko povezano le z zvišanjem ravni hemoglobina;
· Kratko obdobje opazovanja;
· Študijo je sponzoriral proizvajalec zdravil;
· Ni podatkov o vplivu ekulizumaba v primerjavi s placebom na splošno preživetje, tveganje za preoblikovanje v AML in MDS. Povečanje celotnega preživetja je bilo prikazano le v eni zgodovinsko nadzorovani študiji (obdobje 1997–2004). Leta 2013 so bili objavljeni podatki treh prospektivnih študij 195 bolnikov s PNH in hemolizo, ki so pokazali 97,6-odstotno stopnjo preživetja po 36 mesecih, vendar ni bilo primerjave s placebo skupino.
· Omejeni podatki o uporabi ekulizumaba pri nosečnicah. Nosečnost poveča pojavnost hudih življenjsko nevarnih zapletov PNH. Obstaja velika verjetnost, da ekulizumab prehaja krvno-placentno pregrado in materino mleko. Zaradi redkosti bolezni trenutno ni nadzorovanih študij učinkovitosti ekulizumaba pri nosečnicah. Opisana sta dva primera predpisovanja ekulizumaba nosečnicam od 4. do 5. tedna nosečnosti, čemur je sledil nezapleten potek nosečnosti in rojstvo zdravih otrok
· Tudi pri dolgotrajnem zdravljenju, ki traja približno 30 mesecev, ostane približno 18% bolnikov odvisnih od transfuzije. Možna razlaga tega pojava je sodelovanje v procesih intravaskularne hemolize C3 fragmenta komplementa, ki ga ekulizumab ne zavira.

Ekulizumab lahko priporočimo za vključitev v program zdravljenja za naslednje kategorije bolnikov s klasičnim PNH, starejšim od 18 let:
Transfuzijska odvisnost zaradi kronične hemolize ( stopnja dokazov A);
Prisotnost trombotičnih zapletov ( stopnja dokazovD);
Nosečnost pri bolnikih s PNH ( stopnja dokazovD).

Pri določanju indikacij za zdravljenje z ekulizumabom ne smemo upoštevati le ravni LDH.

Način uporabe in doziranje ekulizumaba
Zdravilo se daje intravensko, kapljično, v 25-45 minutah - za odrasle.
Potek zdravljenja vključuje 4-tedenski začetni cikel, ki mu sledi vzdrževalni cikel. Začetni cikel je 600 mg zdravila enkrat na teden 4 tedne. Vzdrževalno zdravljenje - 900 mg 5. teden, čemur sledi uvedba 900 mg zdravila vsakih (14 ± 2) dni.

"Prebojna" hemoliza.
Standardni režim zdravljenja z ekulizumabom zadostuje za popolno in stabilno blokado hemolize, ki jo povzročajo komplementi. Pri nekaterih bolnikih zaradi
značilnosti presnove zdravila ali okužbe lahko razvijejo "prodorno" hemolizo. V tem primeru se znaki hemolize pojavijo v 2-3 dneh.
pred naslednjo uporabo ekulizumaba. Pri bolnikih se lahko razvije hemoglobinurija, povrnejo se prvotni simptomi (težko dihanje, šibkost, krč gladkih mišic itd.), Potreba po transfuzijah, zvišanje ravni LDH, retikulocitov in zmanjšanje ravni haptoglobina. Zdravljenje prodorne hemolize vključuje skrajšanje intervala med injekcijami ekulizumaba na 12 dni ali povečanje odmerka na 1200 mg z 1-2 injekcijama.

Preprečevanje in zdravljenje meningokokne okužbe.
Med zdravljenjem z ekulizumabom je treba nadzorovati pojav simptomov okužbe in bakterijskih okužb, pravočasno predpisati antibiotike. Pri diagnosticiranju meningokokne okužbe se naslednji odmerek zdravila prekliče.
Mehanizem delovanja zdravila ekulizumab kaže na povečano tveganje za okužbo z meningokokom ( Neisseria meningitidis) glede na njegovo uporabo (stopnja dokazov B).
Vse bolnike je treba cepiti proti meningokokom 2 tedna pred začetkom uporabe zdravila in ponovno cepljenje med 2,5–3 leti zdravljenja. Najbolj prednostno je tetravalentno konjugirano cepivo proti serotipom A, C, Y in W135. V primeru nujne potrebe po zdravljenju z ekulizumabom pri necepljenem bolniku je mogoče začeti zdravljenje z ustrezno antibiotično profilakso, ki naj traja 2 tedna po cepljenju proti meningokokni okužbi.

Simptomatsko zdravljenje.
Pri zdravljenju ekulizumaba simptomatsko zdravljenje vključuje imenovanje folne kisline (5 mg / dan), vitamina B12 (s pomanjkanjem), pripravkov železa (s pomanjkanjem), antikoagulantov (varfarin, heparin z nizko molekulsko maso) za trombotične zaplete, transfuzija krvnih pripravkov, odvisno od kliničnih simptomov, hidracija z razvojem hemolitične krize. Pripravke iz železa je treba predpisovati previdno zaradi možnosti povečane hemolize.

Antikoagulantna terapija.
Po trombotičnem dogodku se lahko priporoči dolgotrajno (vseživljenjsko) zdravljenje z antikoagulanti (derivati \u200b\u200bkumarina ali heparini). Terapija Budd-Chiarijevega sindroma zahteva, da mora biti bolnik na specializiranem kirurškem oddelku za lokalno in sistemsko trombolizo. V nekaterih primerih je lahko indicirano antikoagulantno zdravljenje za primarno preprečevanje tromboze, kadar je klon PNH odkrit v ≥ 50% granulocitov in ob prisotnosti dodatnih tveganj za trombotične zaplete, razen pri bolnikih z aplazijo kostnega mozga.

Podpora za transfuzijo.
Indikacije za transfuzijo krvnih komponent:

Suspenzija / masa eritrocitov.
· Glede suspenzije / mase eritrocitov je nujna izbira po krvni skupini in Rh faktorju;
· Pri bolnikih z večkratnimi transfuzijami v anamnezi je priporočljivo izbrati naslednje antigene: Kell, Duffy, Kidd, MNS;
· Tik pred transfuzijo suspenzije / mase eritrocitov je treba opraviti test združljivosti s standardnimi serumi;
Mejni kazalniki, pri katerih se upošteva potreba po transfuziji suspenzije / mase eritrocitov: Hb<80 г/мл, Ht <25%;
· Izračun največje prostornine suspenzije / mase eritrocitov se določi po naslednji formuli: Hb (g / dl) x4 x masa prejemnika (kg).

Koncentrat trombocitov.
· Koncentrat trombocitov mora biti izbran glede na krvno skupino in Rh faktor;
Transfuzija koncentrata trombocitov, da se prepreči krvavitev, se izvaja na ravni Tr<10 тыс кл/мкл;
Pri bolnikih z vročinsko vročino, krvavitvijo sluznic je priporočljivo transfundirati koncentrat trombocitov na Tr<20 тыс кл/мкл;
Pri načrtovanju invazivne intervencije za pacienta je priporočljivo transfundirati koncentrat trombocitov na Tr<50 тыс кл/мкл;
· Terapevtski odmerek trombocitov, priporočljiv za odrasle: 3 x 10 11 celic / l v prostornini 200-300 ml.

Ocena učinkovitosti transfuzije:
· Ustavitev krvavitve;
Določanje ravni trombocitov naslednji dan - obstojna raven Tr<20 тыс кл/мкл свидетельствует о рефрактерности к трансфузиям;
Če so izključeni vsi vzroki za trombocitopenijo, je treba preskusiti prisotnost protiteles proti levkocitom;
· Če se odkrijejo protitelesa, je treba transfuzijo trombocitov opraviti od dajalca, združljivega s HLA.

Sveže zamrznjena plazma.
Ker FFP vsebuje komplement, lahko njegova transfuzija pri bolnikih s PNH povzroči razvoj hemolize. Izogibati se je treba transfuziji FFP v PNH.

Zdravljenje ambulantno:
- seznam osnovnih zdravil z navedbo oblike sproščanja (s 100-odstotno verjetnostjo uporabe):

Antineoplastična in imunosupresivna zdravila
... ekulizumab * 300 mg, koncentrat za raztopino za infundiranje, 10 mg / ml.

Filgrastim, raztopina za injiciranje 0,3 mg / ml, 1 ml;
· Ondansetron, raztopina za injiciranje 8 mg / 4 ml.

Antibakterijska sredstva
Azitromicin tableta / kapsula, 500 mg
Amoksicilin / klavulanska kislina, filmsko obložena tableta, 1000 mg;
Moksifloksacin tableta, 400 mg
Ofloksacin, tableta, 400 mg;
Tableta ciprofloksacina, 500 mg;
· Metronidazol, tableta, 250 mg, zobni gel 20 g;
Tableta eritromicin 250 mg.

Anidulafungin, liofiliziran prašek za raztopino za injiciranje, 100 mg / viala;



Klotrimazol, raztopina za zunanjo uporabo 1% 15 ml;

Flukonazol kapsula / tableta 150 mg.

Aciklovir, tableta, 400 mg, gel v epruveti 100000 ED 50 g;


Famciklovir tablete, 500 mg

Rešitve, ki se uporabljajo za odpravo kršitev vodnega, elektrolitskega in kislinsko-bazičnega ravnovesja

· Dekstroza, raztopina za infundiranje 5% 250 ml;
· Natrijev klorid, raztopina za infundiranje 0,9% 500 ml.

Heparin, raztopina za injiciranje 5000 ie / ml, 5 ml; (za izpiranje katetra)

Tableta rivaroksaban;
Kapsula / tableta traneksaminske kisline 250 mg;

Ambroxol, raztopina za peroralno uporabo in inhalacijo, 15 mg / 2 ml, 100 ml;

Atenolol 25 mg tableta



Drotaverin, 40 mg tableta;


Levofloksacin, tableta, 500 mg

Lizinopril, 5 mg tableta;
Tableta metilprednizolon, 16 mg;

Omeprazol, kapsula 20 mg;

Prednizolon, tableta, 5 mg;
· Dioktatrični smektit, prašek za pripravo suspenzije za peroralno dajanje, 3,0 g;

Torasemid, 10 mg tableta;
Fentanil, terapevtski transdermalni sistem 75 mcg / h; (za zdravljenje kronične bolečine pri bolnikih z rakom)

Stacionarno zdravljenje z mamili:
- seznam osnovnih zdravil z navedbo oblike sproščanja (s 100-odstotno verjetnostjo uporabe):

Ekulizumab * 300 mg, koncentrat za raztopino za infundiranje, 10 mg / ml.

- seznam dodatnih zdravil z navedbo oblike sproščanja (manj kot 100% verjetnost uporabe):

Zdravila, ki oslabijo toksični učinek zdravil proti raku
... filgrastim, raztopina za injiciranje 0,3 mg / ml, 1 ml;
... ondansetron, raztopina za injiciranje 8 mg / 4 ml.

Antibakterijska sredstva
Azitromicin, tableta / kapsula, 500 mg, liofiliziran prašek za pripravo raztopine za intravensko infuzijo, 500 mg;
Amikacin, prašek za injiciranje, 500 mg / 2 ml ali prašek za pripravo raztopine za injiciranje, 0,5 g;
Amoksicilin / klavulanska kislina, filmsko obložena tableta, 1000 mg, prašek za pripravo raztopine za intravensko in intramuskularno dajanje 1000 mg + 500 mg;
Vankomicin v prahu / liofilizat za pripravo raztopine za infundiranje 1000 mg;
· Gentamicin, raztopina za injiciranje 80 mg / 2 ml 2 ml;
Imipinem, cilastatin v prahu za raztopino za infundiranje, 500 mg / 500 mg;
· Kolistimetat natrij *, liofilizat za pripravo raztopine za infundiranje 1 milijon enot / viala;
· Metronidazol tableta, 250 mg, raztopina za infundiranje 0,5% 100 ml, zobni gel 20 g;
Levofloksacin, raztopina za infundiranje 500 mg / 100 ml, tableta 500 mg;
Linezolid, raztopina za infundiranje 2 mg / ml;
Meropenem, liofilizat / prašek za raztopino za injiciranje 1,0 g;
Moksifloksacin, tableta 400 mg, raztopina za infundiranje 400 mg / 250 ml
Ofloksacin, tableta 400 mg, raztopina za infundiranje 200 mg / 100 ml;
Piperacilin, tazobaktamski prašek za pripravo raztopine za injiciranje 4,5 g;
Tigeciklin *, liofiliziran prašek za pripravo raztopine za injiciranje 50 mg / vialo;
Tikarcilin / klavulanska kislina, liofiliziran prašek za pripravo raztopine za infundiranje 3000 mg / 200 mg;
Cefepim v prahu za raztopino za injiciranje 500 mg, 1000 mg
· Cefoperazon, sulfaktamski prašek za raztopino za injiciranje 2 g;
Ciprofloksacin, raztopina za infundiranje 200 mg / 100 ml, 100 ml, 500 mg tableta;
Tableta eritromicin 250 mg
Ertapenem liofilizat za pripravo raztopine za intravenske in intramuskularne injekcije 1 g.

Protiglivična zdravila
Amfotericin B *, liofiliziran prašek za raztopino za injiciranje, 50 mg / viala;
Anidulofungin, liofiliziran prašek za raztopino za injiciranje, 100 mg / viala;
Vorikonazol, prašek za raztopino za infundiranje 200 mg / viala;
Tableta vorikonazol, 50 mg;
Itrakonazol, peroralna raztopina 10 mg / ml 150,0;
Kaspofungin, liofilizat za pripravo raztopine za infundiranje 50 mg;
· Klotrimazol, krema za zunanjo uporabo 1% 30g, raztopina za zunanjo uporabo 1% 15ml;
Mikafungin, liofiliziran prašek za pripravo raztopine za injiciranje 50 mg, 100 mg;
Flukonazol, kapsula / tableta 150 mg, raztopina za infundiranje 200 mg / 100 ml, 100 ml.

Protivirusna zdravila
Aciklovir, krema za zunanjo uporabo, 5% - 5,0, tableta - 400 mg, prašek za raztopino za infundiranje, 250 mg;
Tableta valaciklovir, 500 mg;
Valganciklovir tableta, 450 mg
Ganciklovir *, liofilizat za pripravo raztopine za infundiranje 500 mg;
Famciklovir, tablete, 500 mg št. 14.

Zdravila za pnevmocistozo
Sulfametoksazol / trimetoprim, koncentrat za raztopino za infundiranje (80 mg + 16 mg) / ml, 5 ml;
Sulfametoksazol / trimetoprim, 480 mg tableta.

Dodatna imunosupresivna zdravila:
Deksametazon, raztopina za injiciranje 4 mg / ml 1 ml;
Metilprednizolon, 16 mg tableta, 250 mg injekcija;
Prednizolon, raztopina za injiciranje 30 mg / ml 1 ml, tableta 5 mg.

Rešitve, ki se uporabljajo za odpravo kršitev vodnega, elektrolitskega in kislinsko-bazičnega ravnovesja, parenteralne prehrane
· Albumin, raztopina za infundiranje 10%, 100 ml;
· Albumin, raztopina za infundiranje 20% 100 ml;
· Voda za injekcije, raztopina za injekcije 5 ml;
Dekstroza, raztopina za infundiranje 5% - 250 m, 5% - 500 ml; 40% - 10 ml, 40% - 20 ml;
Kalijev klorid, raztopina za intravensko uporabo 40 mg / ml, 10 ml;
· Kalcijev glukonat, raztopina za injiciranje 10%, 5 ml;
· Kalcijev klorid, raztopina za injiciranje 10% 5 ml;
Magnezijev sulfat, raztopina za injiciranje 25% 5 ml;
· Manitol, raztopina za injiciranje 15% -200,0;
Natrijev klorid, raztopina za infundiranje 0,9% 500 ml;
· Natrijev klorid, raztopina za infundiranje 0,9% 250 ml;
· Natrijev klorid, kalijev klorid, raztopina natrijeve ocetne kisline za infundiranje v viali 200 ml, 400 ml;
· Natrijev klorid, kalijev klorid, raztopina natrijevega acetata za infundiranje 200 ml, 400 ml;
Natrijev klorid, kalijev klorid, raztopina natrijevega bikarbonata za infundiranje 400 ml;
L-alanin, L-arginin, glicin, L-histidin, L-izolevcin, L-levcin, L-lizin hidroklorid, L-metionin, L-fenilalanin, L-prolin, L-serin, L-treonin, L-triptofan , L-tirozin, L-valin, natrijev acetat trihidrat, natrijev glicerofosfat pentihidrat, kalijev klorid, magnezijev klorid heksahidrat, glukoza, kalcijev klorid dihidrat, oljčno in sojino olje emulzija mešanica d / inf.: Trikomorne posode 2 l
Hidroksietil škrob (penta škrob), raztopina za infundiranje 6% 500 ml;
· Kompleks aminokislin, emulzija za infundiranje, ki vsebuje mešanico oljčnega in sojinega olja v razmerju 80:20, raztopino aminokislin z elektroliti, raztopino dekstroze, s skupno kalorično vrednostjo 1 800 kcal 1 500 ml trioddelčna posoda.

Zdravila za intenzivno terapijo (kardiotonična zdravila za zdravljenje septičnega šoka, mišični relaksanti, vazopresorji in zdravila za anestezijo):
· Aminophylline, raztopina za injiciranje 2,4%, 5 ml;
Amiodaron, raztopina za injiciranje, 150 mg / 3 ml;
Atenolol 25 mg tableta
Atracurium besilat, raztopina za injiciranje, 25 mg / 2,5 ml;
Atropin, raztopina za injiciranje, 1 mg / ml;
Diazepam, raztopina za intramuskularno in intravensko uporabo, 5 mg / ml 2 ml;
Dobutamin *, raztopina za injiciranje 250 mg / 50,0 ml;
Dopamin, raztopina / koncentrat za pripravo raztopine za injiciranje 4%, 5 ml;
• preprost inzulin;
· Ketamin, raztopina za injiciranje 500 mg / 10 ml;
· Morfij, raztopina za injiciranje 1% 1 ml;
Noradrenalin *, raztopina za injiciranje 20 mg / ml 4,0;
Pipekuronijev bromid, liofiliziran prašek za injiciranje 4 mg;
· Propofol, emulzija za intravensko dajanje 10 mg / ml 20 ml, 10 mg / ml 50 ml;
· Rokuronijev bromid, raztopina za intravensko dajanje 10 mg / ml, 5 ml;
· Natrijev tiopental, prašek za pripravo raztopine za intravensko dajanje, 500 mg;
Fenilfrin, raztopina za injiciranje 1% 1 ml;
Fenobarbital, 100 mg tableta;
· Človeški normalni imunoglobulin, raztopina za infundiranje;
Adrenalin, raztopina za injiciranje 0,18% 1 ml.

Zdravila, ki vplivajo na sistem strjevanja krvi
Aminokaprojska kislina, raztopina 5% -100 ml;
· Protihibitorni koagulantni kompleks, liofiliziran prašek za pripravo raztopine za injiciranje, 500 ie;
Heparin, raztopina za injiciranje 5000 ie / ml, 5 ml, gel v epruveti 100000 ED 50 g;
· Hemostatska goba, velikost 7 * 5 * 1, 8 * 3;
Nadroparin, raztopina za injiciranje v napolnjenih injekcijskih brizgah, 2850 ie anti-Xa / 0,3 ml, 5700 ie anti-Xa / 0,6 ml;
Enoxaparin, raztopina za injiciranje v brizgah 4000 anti-Xa ie / 0,4 ml, 8000 anti-Xa ie / 0,8 ml.

Druga zdravila
Bupivakain, raztopina za injiciranje 5 mg / ml, 4 ml;
· Lidokain, raztopina za injiciranje, 2%, 2 ml;
· Prokain, raztopina za injiciranje 0,5%, 10 ml;
· Normalna raztopina človeškega imunoglobulina za intravensko uporabo 50 mg / ml - 50 ml;
Omeprazol, kapsula 20 mg, liofiliziran prašek za pripravo raztopine za injiciranje 40 mg;
Famotidin, liofiliziran prašek za pripravo raztopine za injiciranje 20 mg;
Ambroxol, raztopina za injiciranje, 15 mg / 2 ml, raztopina za peroralno uporabo in inhalacijo, 15 mg / 2 ml, 100 ml;
Amlodipin, tableta / kapsula 5 mg;
Acetilcistein, prašek za raztopino za peroralno uporabo, 3 g;
Deksametazon, kapljice za oko 0,1% 8 ml;
Difenhidramin, raztopina za injiciranje 1% 1 ml;
· Drotaverin, raztopina za injiciranje 2%, 2 ml;
Captopril 50 mg tableta
· Ketoprofen, raztopina za injiciranje 100 mg / 2 ml;
Laktuloza, sirup 667g / l, po 500 ml;
Kloramfenikol, sulfadimetoksin, metiluracil, trimekainsko mazilo za zunanjo uporabo 40g;
Lizinopril, 5 mg tableta;
Metiluracil, lokalno mazilo v epruveti 10% 25g;
Nafazolin, kapljice za nos 0,1% 10 ml;
Nicergolin, liofilizat za pripravo raztopine za injiciranje 4 mg;
· Povidon-jod, raztopina za zunanjo uporabo 1 l;
· Salbutamol, raztopina za razpršilec 5 mg / ml-20 ml;
· Smektit dioktaeder, prašek za pripravo suspenzije za peroralno dajanje 3,0 g;
Spironolakton, kapsula 100 mg;
Tobramicin, kapljice za oko 0,3% 5 ml;
Torasemid, 10 mg tableta;
Tramadol, raztopina za injiciranje 100 mg / 2 ml;
Tramadol, peroralna raztopina (kapljice) 100 mg / 1 ml 10 ml;
Fentanil, terapevtski transdermalni sistem 75 mcg / h (za zdravljenje kronične bolečine pri bolnikih z rakom);
Folna kislina, tableta, 5 mg;
Furosemid, raztopina za injiciranje 1% 2 ml;
Kloramfenikol, sulfadimetoksin, metiluracil, trimekainsko mazilo za zunanjo uporabo 40g;
Klorheksidin, raztopina 0,05% 100 ml;
Kloropiramin, raztopina za injiciranje 20 mg / ml 1 ml.

Zdravstvena oskrba v fazi nujne nujne oskrbe:ni izvedeno.

Drugi načini zdravljenja:
Druga ambulantna zdravljenja: ne uporabljajo.

Druge vrste na stacionarni ravni:

Presaditev kostnega mozga (raven dokazov B)
Indikacije za BMT pri PNH so podobne hudi aplastični anemiji.
Medtem ko ekulizumab nadzoruje intravaskularno hemolizo in s tem povezane zaplete PNH, predvsem odvisnost od transfuzije, alogenska presaditev kostnega mozga (BMT) ostaja edina radikalna metoda za zdravljenje te bolezni. Vendar je BMT povezan z visoko smrtnostjo. Tako je bila v retrospektivni študiji na 26 bolnikih s PNH iz Italije, ki so prejemali BMT, 10-letna stopnja preživetja 42% in verjetnost 2-letnega preživetja pri 48 bolnikih, ki so BMT prejeli od HLA-enakega brata ali sestre, v skladu s Mednarodni register za presaditev kostnega mozga je predstavljal 56%. Ne glede na indikacije, pri katerih se izvaja BMT, stopnja zapletov ostaja zelo visoka. Pogostnost reakcij presadka proti gostitelju pri bolnikih s PNH je 42–54%, pri polovici bolnikov se razvije veno-okluzivna bolezen jeter, ne-presaditev ali zavrnitev, poleg tega pa obstaja tveganje za razširitev klonov PNH. BMT in z njim povezani zapleti negativno vplivajo na kakovost življenja bolnikov.

Druge vrste zdravljenja med fazo reševalnega vozila: ne uporabljajo.

Značilnosti vodenja nosečnic.
Nosečnost s PNH je povezana z visoko stopnjo umrljivosti mater in otrok (11,6% oziroma 7,2%).
Trenutno je opisanih le nekaj primerov zdravljenja z ekulizumabom med nosečnostjo z ugodnim izidom za mater in plod. Teratogenih učinkov zdravila ni. Med nosečnostjo se zdravljenja z ekulizumabom ne sme prekiniti. Če bolnica prej ni prejemala ekulizumaba, se lahko zdravilo predpiše med nosečnostjo. V tem primeru je treba zdravljenje z ekulizumabom nadaljevati 3 mesece po porodu. V primerih "prodorne" hemolize med nosečnostjo bo morda potrebna prilagoditev odmerka zdravila (na primer vzdrževalno zdravljenje 900 mg na teden).

Kirurški poseg:
Kirurški poseg, ki se izvaja ambulantno:ni izvedeno.

Bolnišnična kirurgija:
Z razvojem nalezljivih zapletov in življenjsko nevarne krvavitve so bolniki na nujnih kirurških posegih.

Nadaljnje upravljanje:
Med zdravljenjem z ekulizumabom je priporočljivo opraviti naslednje laboratorijske preiskave: CBC z določitvijo retikulocitov, LDH, kreatinina v krvi, natriuretični peptid B v možganih (če je mogoče), D-dimer, serumsko železo, feritin, neposredni antiglobulinski test . Velikost klona PNH se spremlja na podlagi rezultatov zelo občutljive pretočne citometrije.
Pri bolnikih, ki prejemajo ekulizumab, se statistično značilno poveča klon PNH. V študiji TRIUMPH se je klon PNH eritrocitov tipa III v 26 tednih povečal z 28,1% na 56,9%, medtem ko se v skupini s placebom ni spremenil. Če ukinemo ekulizumab, je treba za pravočasno odkrivanje hemolize in preprečevanje morebitnih zapletov spremljati velikost klona PNH, raven retikulocitov, haptoglobina, LDH, bilirubina, D-dimerjev.

Kazalniki učinkovitosti zdravljenja:
Dokončen sistem za oceno odziva na terapijo pri PNH še ni razvit. Pri oceni učinka zdravljenja upoštevajte:
· Klinične manifestacije - šibkost;
· Raven hemoglobina;
· Potreba po transfuziji krvnih komponent;
· Trombotične epizode;
· Aktivnost hemolize (raven retikulocitov, LDH, haptoglobin).

Pripravki (aktivne sestavine), ki se uporabljajo pri zdravljenju

Skupine zdravil po ATC, ki se uporabljajo pri zdravljenju

Hospitalizacija

Indikacije za hospitalizacijo:
Indikacije za nujno hospitalizacijo:
· Novo identificirani APG;
· Trombotični zapleti;
· Hemolitična kriza;
· Febrilna nevtropenija.

Indikacije za načrtovano hospitalizacijo:
· Pregled, določitev taktike za nadaljnje zdravljenje;
· Alogena presaditev kostnega mozga.

Preprečevanje

Preventivni ukrepi:ne.

Informacije

Viri in literatura

1. Zapisniki sej Strokovnega sveta RCHD MHSD RK, 2015
   1. Seznam uporabljene literature: 1. Scottish Intercollegiate Guidelines Network (SIGN). ZNAK 50: priročnik za razvijalce smernic. Edinburgh: ZNAK; 2014. (objava SIGN št. 50). ... Dostopno z URL-ja: http://www.sign.ac.uk 2. Kulagin A.D., Lisukov I.A., Ptushkin V.V., Shilova E.R., Tsvetaeva N.V., Mikhailova E. AND. Nacionalne klinične smernice za diagnozo in zdravljenje paroksizmalne nočne hemoglobinurije, Oncohematology 2/2014 str. 20-28 3. Parker C., Omine M., Richards S. et al. Diagnostika in obvladovanje paroksizmalne nočne hemoglobinurije. Blood 2005; 106: 3699-709. 4. de Latour R. P., Mary J. Y., Salanoubat C. et al. Paroksizmalna nočna hemoglobinurija: naravna anamneza podkategorij bolezni. Blood 2008; 112: 3099-106. 5. Brodsky R. A. Kako zdravim paroksizmalno nočno hemoglobinurijo. Kri 2009; 113: 6522-7. 6. Movalia M. K., Weitz I., Lim S. H., Illingworth A. Incidenca klonov PNH z diagnostično kodo z uporabo visoko občutljive pretočne citometrije. Blood (Povzetki letnega srečanja ASH) 2011; 118: 1033. 7. Wanachiwanawin W., Siripanyaphinyo U., Piyawattanasakul N., Kinoshita T. Kohortna študija narave paroksizmalnih nočnih klonov hemoglobinurije in mutacij PIG-A pri bolnikih z aplastično anemijo. Eur J. Haematol 2006; 76: 502-9. 8. hematologija; Najnovejši priročnik. Pod splošnim uredništvom doktorja medicinskih znanosti. Profesor K.M. Abdulkadirov. Moskva: Založba Eksmo; Sankt Peterburg: Založba SOVA, 2004; 294-299. 9. Borowitz M. J., Craig F. E., Digiuseppe J. A. et al. Smernice za diagnozo in spremljanje paroksizmalne nočne hemoglobinurije in z njo povezanih motenj s pomočjo pretočne citometrije. CytometryB Clin Cytom 2010; 78 (4): 211-30. 10. Schubert J., Alvarado M., Uciechowski P. et al. Diagnoza paroksizmalne nočne hemoglobinurije z uporabo imunofenotipizacije perifernih krvnih celic. Br J Haematol 1991; 79: 487–92 11. Hammons A. H. Diagnostika bolezni notranjih organov, 4. zvezek, Diagnoza bolezni krvnega sistema. Založba: M: Medicinska literatura 2001. str.67, str.100, str.163. 12. Gardner A, Mattiuzzi G, Faderl S, Borthakur G, Garcia-Manero G, Pierce S, Brandt M, Estey E. Randomizirana primerjava kuhanih in nekuhanih diet pri bolnikih, ki se zdravijo z indukcijsko terapijo remisije za akutno mieloično levkemijo. J ClinOncol. 2008 10. december; 26 (35): 5684-8. 13. Carr SE, Halliday V. Raziskovanje uporabe nevtropenične prehrane: raziskava o dietetikih iz Združenega kraljestva. J Hum Nutr Diet. 2014 avgust 28.14 Boeckh M. Nevtropenska dieta - dobra praksa ali mit? Presaditev krvnega mozga Biol. 2012 september; 18 (9): 1318-9. 15. Trifilio, S., Helenowski, I., Giel, M. et al. Izpraševanje vloge nevtropenične prehrane po presaditvi hematopoetskih matičnih celic. Presaditev krvnega mozga Biol. 2012; 18: 1387-1392. 16. DeMille, D., Deming, P., Lupinacci, P. in Jacobs, L.A. Učinek nevtropenične prehrane v ambulanti: pilotna študija. Forum OncolNurs. 2006; 33: 337-343 17. Hillmen P., Hall C., Marsh J. C. et al. Vpliv ekulizumaba na potrebe po hemolizi in transfuziji pri bolnikih s paroksizmalno nočno hemoglobinurijo. N Engl J Med 2004; 350: 552-9. 18. Hillmen P., Young N. S., Schubert J. et al. Inhibitor komplementa ekulizumab pri paroksizmalni nočni hemoglobinuriji. N Engl J Med 2006; 355: 1233–43. 19. Brodsky R. A., Young N. S., Antonioli E. et al. Multicentrična študija 3. faze zaviralca komplementa ekulizumaba za zdravljenje bolnikov s paroksizmalno nočno hemoglobinurijo. Blood 2008; 111 (4): 1840-7. 20. Kelly R. J., Hill A., Arnold L. M. et al. Dolgotrajno zdravljenje z ekulizumabom pri paroksizmalni nočni hemoglobinuriji: trajna učinkovitost in izboljšano preživetje. Krv 2011; 117: 6786-92. 21. Hillmen P., Muus P., Roth A. et al. Dolgoročna varnost in učinkovitost trajnega zdravljenja z ekulizumabom pri bolnikih s paroksizmalno nočno hemoglobinurijo. Br J Haemotol 2013; 162 (1): 62–73. 22. Dmytrijuk A, Robie-Suh K, Cohen MH, Rieves D, Weiss K, Pazdur R. Poročilo FDA: ekulizumab (Soliris) za zdravljenje bolnikov s paroksizmalno nočno hemoglobinurijo Onkolog. 2008 september; 13 (9): 993-1000. 23. Martí-Carvajal AJ, Anand V, Cardona AF, Solà I. Ekulizumab za zdravljenje bolnikov s paroksizmalno nočno hemoglobinurijo. Cochrane Database Syst Rev. 2014 30. oktober; 10: CD010340. 24. Kelly R, Arnold L, Richards S, Hill A, Bomken C, Hanley J, Loughney A, Beauchamp J, Khursigara G, Rother RP, Chalmers E, Fyfe A, Fitzsimons E, Nakamura R, Gaya A, Risitano AM, Schubert J, Norfolk D, Simpson N, Hillmen P. Obvladovanje nosečnosti pri paroksizmalni nočni hemoglobinuriji pri dolgoročnem ekulizumabu. British Journal of Hematology, 2010; 149: 446-450. 25. Risitano AM. Paroksizmalna nočna hemoglobinurija in sistem komplementa: nedavna spoznanja in nove strategije proti dopolnjevanju Adv Exp Med Biol. 2013; 735: 155-72. 26. Paroksizmalna nočna hemoglobinurija (PNH). Priporočila društva za diagnozo in terapijo hematoloških in onkoloških bolezni, 2012. www.dgho-onkopedia.de 27. Hall C., Richards S., Hillmen P. Primarna profilaksa z varfarinom preprečuje trombozo pri paroksizmalni nočni hemoglobinuriji (PNH). Blood 2003; 102: 3587-91. 28. Santarone S., Bacigalupo A., Risitano A. M. et al. Presaditev hematopoetskih matičnih celic za paroksizmalno nočno hemoglobinurijo: dolgoročni rezultati retrospektivne študije v imenu Gruppo Italiano Trapianto Midollo Osseo (GITMO). Haematologica 2010; 95: 983-8. 29. Saso R., Marsh J., Cevreska L. et al. Presaditve kostnega mozga za paroksizmalno nočno hemoglobinurijo. Br J Haematol 1999; 104: 392-6. 30. de Latour R. P., Schrezenmeier H., Mary J-Y. et al. Presaditev matičnih celic za paroksizmalnokturno hemoglobinurijo: stalna skupna študija skupine AAWP EBMT in Francoskega združenja za hematologijo (EBMTabstract 316). Presaditev kostnega mozga 2009; 43 (priloga 1): 57-8. 31. Armitage J. O. Presaditev kostnega mozga. N Engl J Med 1994; 330: 827-38. 32. Benavides Lopez E. Klonska ekspanzija PNH po presaditvi kostnega mozga: poročilo o primeru. Haematologica 2011; 96: 524. 33. Fraser C. J., Bhatia S., Ness K. et al.Vpliv kronične bolezni presadka proti gostitelju na zdravstveno stanje preživelih s presaditvijo hematopoetskih celic: poročilo študije o presaditvi kostnega mozga, kri 2006; 108: 2867-73. 34. Bieri S., Roosnek E., Helg C. et al.Kvaliteta življenja in socialna integracija po alogenskem hematopoetskem SCT. Bone MarrowTransplant 2008; 42: 819-27.

Informacije

Seznam razvijalcev protokolov s podatki o kvalifikacijah:

1) Kemaykin Vadim Matveevich - kandidat medicinskih znanosti, JSC "Nacionalni znanstveni center za onkologijo in transplantologijo", vodja Oddelka za onkohematologijo in presaditev kostnega mozga.
2) Klodzinsky Anton Anatolyevich - kandidat za medicinske vede, JSC "Nacionalni znanstveni center za onkologijo in transplantologijo", hematolog Oddelka za onkohematologijo in presaditev kostnega mozga.
3) Ramazanova Raigul Mukhambetovna - doktor medicinskih znanosti, profesor JSC Kazahstanske medicinske univerze za stalno izobraževanje, vodja hematološkega tečaja.
4) Gabbasova Saule Telembaevna - RSE na REM "Kazahstanski raziskovalni inštitut za onkologijo in radiologijo", vodja oddelka za hemoblastozo.
5) Karakulov Roman Karakulovich - doktor medicinskih znanosti, profesor, akademik Moskovskega letalskega inštituta Republikanskega državnega podjetja na Kazahstanskem raziskovalnem inštitutu za onkologijo in radiologijo, glavni raziskovalec na oddelku za hemoblastozo.
6) Tabarov Adlet Berikbolovich - vodja oddelka za upravljanje inovacij Republikanskega državnega podjetja na REM "Bolnišnica Medicinskega centra, Upravni oddelek predsednika Republike Kazahstan", klinični farmakolog, pediater.
7) Rapilbekova Gulmira Kurbanovna, doktorica medicinskih znanosti. JSC "Nacionalno raziskovalno središče za materinstvo in otroštvo" - vodja porodniškega oddelka №1.

Izjava o nasprotju interesov ni:odsoten.

Ocenjevalci:
1) Afanasjev Boris Vladimirovič - doktor medicinskih znanosti, direktor Znanstvenoraziskovalnega inštituta za otroško onkologijo, hematologijo in transplantologijo po imenu R.M. Gorbacheva, vodja oddelka za hematologijo, transfuziologijo in transplantologijo državnega proračunskega splošnega izobraževalnega zavoda za visoko strokovno izobraževanje Prve državne medicinske univerze v Sankt Peterburgu po imenu V.I. I.P. Pavlova.
2) Rakhimbekova Gulnar Ayapbekkyzy - doktor medicinskih znanosti, profesor, JSC "Nacionalni znanstveni medicinski center", vodja oddelka.
3) Pivovarova Irina Alekseevna - zdravnica, zdravnica, magistrica poslovne administracije, glavna samostojna hematologinja na Ministrstvu za zdravje in socialni razvoj Republike Kazahstan.

Navedba pogojev za revizijo protokola:revizija protokola po treh letih in / ali ko se pojavijo nove metode diagnoze in / ali zdravljenja z višjo stopnjo dokazov.

Priložene datoteke

Pozor!

• Samozdravljenje lahko škoduje vašemu zdravju.
• Informacije, objavljene na spletnem mestu MedElement in v mobilnih aplikacijah "MedElement", "Lekar Pro", "Dariger Pro", "Bolezni: vodnik za terapevta", ne morejo in ne smejo nadomestiti osebnega posveta z zdravnikom. Obvestite zdravstvenega delavca, če imate kakršno koli bolezen ali simptome, ki vas motijo.
• O izbiri zdravil in njihovem odmerjanju se je treba pogovoriti s strokovnjakom. Samo zdravnik lahko predpiše potrebno zdravilo in njegov odmerek ob upoštevanju bolezni in stanja bolnikovega telesa.
• Spletna stran in mobilne aplikacije MedElement "MedElement", "Lekar Pro", "Dariger Pro", "Diseases: Therapist's Guide" so izključno informacijski in referenčni viri. Informacije, objavljene na tej spletni strani, se ne smejo uporabljati za nepooblaščene spremembe zdravniškega recepta.
• Uredniki MedElementa niso odgovorni za kakršno koli škodo za zdravje ali materialno škodo, ki bi nastala zaradi uporabe te strani.

Paroksizmalna nočna hemoglobinurija je hudo pridobljena patologija skupine hemolitičnih anemij. Bolezen Markiafava-Mikeli ali bolezen Strubing-Markiafava, druga imena te patologije, povzročata uničenje rdečih krvnih celic v krvi. Bolezen je zelo redka, za 500 tisoč prebivalcev se lahko sreča 1 oseba s to patologijo.

Da vas ne bi skrbelo za razvoj morebitnih zapletov in posledic patologije, morate vedeti, kakšna je diagnoza paroksizmalne nočne hemoglobinurije, simptomov in zdravljenja patologije.

Vzroki za hemoglobinurijo

Kot smo že omenili, je paroksizmalna nočna hemoglobinurija zelo redka bolezen, poleg tega pa patologijo najpogosteje najdemo pri ljudeh, starih od 20 do 40 let. V medicinski praksi so znani tudi primeri razvoja bolezni v starosti ali pri otrocih, ki pa predstavljajo zanemarljiv odstotek.

Domneva se, da paroksizmalno nočno hemoglobinurijo (PNH) povzroča mutacijska reakcija gena izvornih celic (PIG-A), ki je sestavni del X-kromosoma v kostnem mozgu, kot odgovor na nedoločene vplivne dejavnike. Nekateri viri trdijo, da vzroki genske mutacije niso znani.

Drugi trdijo, da se hemoglobinurija lahko razvije v ozadju nalezljivih bolezni, pljučnice, travme, zastrupitve, podhladitve in opeklin ter celo hudega fizičnega stresa.

Toda soglasno mnenje o etiologiji patologije še ni ugotovljeno.

Razkrita je bila jasna povezava med razvojem diagnoze paroksizmalne nočne hemoglobinurije kot simptoma sočasnih patologij. Medicinske raziskave so pokazale, da se PNH v 30% primerov razvije kot posledica aplastične anemije in drugih patologij žilnega sistema.

Dobro znan argument je, da lahko celo ena mutirana celica povzroči razvoj hude oblike patološkega stanja. Med tvorbo rdečih krvnih celic, ki poteka v kostnem mozgu, se matične celice delijo, dozorijo in sprostijo v krvni obtok. En spremenjeni gen je razdeljen na par, tiste pa na par itd. To pomeni, da se ena celica samopodvaja in postopoma napolni kri s poškodovanimi eritrociti.

Bistvo poškodbe rdečih krvnih celic je nepopolna ali manjkajoča beljakovinska membrana, ki služi zaščiti celic pred imunskim sistemom. Ob najmanjših okvarah celice jo imunost telesa uniči, zaradi česar se razvije diagnoza, kot je hemoliza - intravaskularno uničenje eritrocitov, za katero je značilno sproščanje čistega hemoglobina v kri.

Isti proces se pojavi pri kronični hemolitični anemiji, zato je paroksizmalna nočna hemoglobinurija njen analog ali, kot pogosto pravijo zdravniki, akutna pridobljena oblika. Glavna in edina razlika med temi patologijami je načelo njihovega razvoja.

Hemolitična anemija je prirojena patologija, pridobljena je hemoglobinurija. Poškodovani eritrociti se lahko razširijo tudi na druge trdne elemente žilne tekočine: levkocite in trombocite.

Simptomi nočne hemoglobinurije

Simptomi bolezni Markiafava-Micheli so odvisni od vzročne razvrstitve patologije. Kot je bilo ugotovljeno, je bolezen lahko samostojna, v skladu s tem ločimo idiopatsko obliko PNH. Zaradi razvoja patologije v ozadju aplastične anemije ima paroksizmalna nočna hemoglobinurija obliko sindroma. Najbolj redka je idiomatska oblika PNH, ki se pojavi v ozadju hipoplazije hematopoeze.

Za katero koli obliko bolezni je nemogoče ločiti različne simptome, saj je zelo spremenljiva. Potek bolezni je lahko navzven asimptomatski, v tem primeru je patologijo mogoče prepoznati le z laboratorijsko diagnozo. Drugi bolniki imajo hud anemični sindrom.

Na splošno je mogoče določiti majhno posploševanje vseh možnih manifestacij nočne hemoglobure, s čimer se poudari glavna simptomatska slika.

• Proces hemolize (uničenje eritrocitov in hemoglobina) se pojavlja predvsem ponoči (nočna hemoglobinurija), zato bo z jutranjim uriniranjem barva urina dobila temno rjav odtenek. Podnevi in \u200b\u200bzvečer tega znaka ne opazimo.
• Zaradi kvantitativnega zmanjšanja krvi rdečih krvnih celic opazimo anemični sindrom. Njene manifestacije so neposredno povezane s stradanjem organov in tkiv s kisikom. Zato lahko bolnik občuti glavobole, omotico, utripanje črnih pik pred očmi, splošno šibkost, hitro utrujenost, napade angine pektoris in tahikardijo.

• V primeru sočasnih nalezljivih bolezni, krvavitev, fizičnega napora itd. Se lahko razvije hemolitična kriza, ki se kaže v močnem skoku količine hemoglobina v žilni tekočini, pa tudi v hudi slabosti, vročini, bolečinah v kosti, lahko se pojavi rumenjak kože in zmerna splenomegalija (povečanje vranice).
• Hemoglobinurijo spremlja kršitev koncentracije dušikovega oksida v plazmi, ki tako v ozadju kriz kot pri hudi patologiji povzroča erektilno disfunkcijo pri moških.
• Zaradi okvare trombocitov (krvnih celic, odgovornih za strjevanje krvi) lahko pride do tromboze, ki jo najpogosteje opazimo v žilah. Isti postopek lahko sproži snov, ki se sprosti, ko se uničijo trdne krvne celice. Povzroča povečano strjevanje žilne tekočine, od katere je odvisna nagnjenost k trombozi. Takšne kršitve so lahko usodne.

Najočitnejše simptome paroksizmalne nočne hemoglobinurije lahko ugotovimo z laboratorijsko diagnozo. Študije bodo pokazale raven hemoglobina v krvi, stanje celic, prisotnost trombopenije in levkopenije, raven železa in drugih mikroelementov itd. Za popolno in natančno diagnozo hemoglobinurije traja veliko časa, saj lahko ta bolezen bodite skrbno skriti pod krinko drugih patologij.

Zato je najbolj racionalen način pravočasnega odkrivanja bolezni Markiafava-Micheli redni preventivni pregled.

Zdravljenje paroksizmalne nočne hemoglobinurije

Obdobje odkrivanja paroksizmalne nočne hemoglobinurije določa potrebne metode zdravljenja in določa prognozo izida patologije, ki je v večini primerov neugodna. To je posledica odsotnosti posebnega vzroka za razvoj in nezmožnosti njegovega odpravljanja. Zato ni natančne metode zdravljenja s PNH.

Vsi terapevtski ukrepi so namenjeni odpravi simptomatskih manifestacij. Edini učinkovit način, kako se popolnoma znebiti mutiranih celic, je presaditev rdečega kostnega mozga (kraj, kjer nastajajo krvne celice).

Z razvojem hemolitične krize, akutne oblike hemolize, je bolniku predpisana večkratna transfuzija mase eritrocitov. Takšnih transfuzij je lahko 5 ali več. Število postopkov in njihova pogostost se določi s ponavljajočimi se analizami in izvede ob naslednji reprodukciji okvarjenih eritrocitov.

V redkih primerih se vranica odstrani. Znaki, ki vodijo do splenektomije, so močno povečanje organa in manifestacija razvoja infarktnega stanja.

Preostali terapevtski ukrepi sestavljajo jemanje drugačnih skupinskih zdravil, ki olajšajo potek patologije. Glavna zdravila so pripravki iz skupin steroidnih hormonov, citostatiki ter pripravki iz železa in folne kisline.

Nerobol

Najpogostejše pri imenovanju zdravnikov za boj proti simptomatski manifestaciji paroksizmalne nočne hemoglobinurije je zdravilo Nerobol. Je hormonsko zdravilo iz skupine anaboličnih steroidov. Delovanje zdravila je usmerjeno:

• za spodbujanje sinteze beljakovin v telesu pacienta, ki v okvarjeni membrani eritrocitov ni dovolj;
• ugodno vpliva na presnovo dušika;
• upočasni izločanje kalija, žvepla in fosforja, ki so potrebni za normalno sintezo beljakovin;
• izzove povečano fiksacijo kalcija v kosteh.

Po jemanju tega zdravila bolnik začuti povečan apetit, intenzivno povečanje mišične mase, pospešitev poapnenja kosti in tudi veliko boljše splošno stanje telesa.

Uporaba zdravila se začne z 10 g, postopoma narašča na 30 g, 1-2 odmerka na dan. Za otroke je odmerek zdravila 1 tableta vsak drugi dan, v hujših primerih pa vsak dan. Potek zdravljenja z Nerobolom je od 2 do 3 mesece.

Po koncu uporabe zdravila pri mnogih bolnikih opazimo povečanje hemolize.

Uporaba zdravila Nerobol se lahko izvaja strogo v skladu z navodili lečečega zdravnika.

Heparin

Heparin je neposreden antikoagulant - sredstvo za zaviranje strjevanja krvi. Pri paroksizmalni nočni hemoglobinuriji je predpisano za preprečevanje nastajanja krvnih strdkov, ki otežujejo potek bolezni.

Odmerjanje in pogostost dajanja sta popolnoma individualizirana, odvisno od zapletenosti patologije in tveganja za nastanek krvnih strdkov v žilah.

Na koncu tečaja s Heparinom zdravnik predpiše posredne antikoagulante, da ohrani normalno raven strjevanja krvi.

Ekulizumab je zdravilo, ki je sestavljeno iz humaniziranih monokanalnih protiteles. Načelo delovanja zdravila je ustaviti intravaskularno hemolizo in neposredno nasprotovati krvnim komplimentom. Posledično se naravno uničenje okvarjenih eritrocitov s strani imunskega sistema ustavi.

To zdravilo je najdražje zdravilo na svetu. Njegov mehanizem delovanja in razvoj možnih posledic njegove uporabe niso bili dovolj proučeni.

Pripravki iz železa in folne kisline

V primeru motenj v delovanju rdečega kostnega mozga pride do pomanjkanja železa in folne kisline, ki sta nujni za normalno hematopoezo. Terapija zdravljenja PNH vključuje dajanje pripravkov iz teh mikroelementov za kompenzacijo patoloških izgub.

Odmerjanje in način jemanja zdravila določi lečeči zdravnik. Najpogosteje so predpisani Sorbifer, Tardiferron, Ferretab, Fenuls itd. Ta zdravila vključujejo kompleks elementov v sledovih, potrebnih za normalno tvorjenje trdnih krvnih delcev v rdečem kostnem mozgu.

Podpora jeter

Okrepljeno zdravljenje v boju proti paroksizmalni nočni hemoglobinuriji močno vpliva na jetra. Če podpornega zdravljenja jeter ni, lahko to preprosto zavrne. Zato je pomembno jemati zdravila s hepatoprotektivnim delovanjem. Ta zdravila so lahko:

• Maksar;
• Heptral;
• Carsil.

Poleg tega obstajajo številna živila, ki lahko pomagajo popraviti jetrne celice. Sem spadajo buča, suhe marelice, alge, oljčno olje, mlečni izdelki in drugo. Glavna stvar je, da je ne poslabšamo z nezdravo hrano v trenutkih oslabelosti jeter.

Po prepoznavanju bolezni zdravniki dajejo napačne napovedi. Statistični podatki pravijo, da lahko bolnik po ugotovitvi diagnoze približno 5 let živi na vzdrževalnem zdravljenju.

Zaradi neznanega izvora bolezni in netočnosti razlogov za njen razvoj paroksizmalne nočne hemoglobinurije ni mogoče preprečiti.

ugotovitve

Markiafava-Michelijeva bolezen ali paroksizmalna nočna hemoglobinurija je resna bolezen, ki je lahko usodna tudi z intenzivno terapijo. Edino možno okrevanje se šteje za presaditev rdečega kostnega mozga, v katerem nastajajo krvne celice. Poleg tega patologija vključuje tudi razvoj sočasnih bolezni, ki niso nič manj nevarne za bolnikovo stanje.

Zato zdravniki soglasno izjavijo, da je najboljša metoda za preprečevanje kakršne koli patologije redno opraviti popoln zdravniški pregled. Morda, če je bolezen šele na stopnji nastanka, jo je mogoče trajno odstraniti. Pri tako resnih boleznih je glavno vprašanje čas. Skrbeti morate zase in za svoje telo.

Pri tej skupini bolnikov ni nagnjenosti k anemiji v družini, sočasnih prirojenih nepravilnosti in motenj v novorojenčku. Aplastična anemija se lahko pojavi pri kateri koli starosti pri otrocih in odraslih, včasih je lahko povezana s posebno zastrupitvijo ali okužbo, vendar pogosto takšnega razmerja ne opazimo in takrat anemija velja za "idiopatsko".

Nekatera zdravila, kot so 6-merkaptopurin, metotreksat, ciklofosfamin in busulfan, imajo določeno predvidljivo od odmerka odvisno sposobnost zaviranja kostnega mozga. Če se ta depresija nadaljuje, bo privedla do aplazije kostnega mozga, ki se po umiku zdravila običajno hitro razreši. Ta zdravila z enakim mehanizmom kot z zaviranjem rasti levkemičnih celic poškodujejo normalne celice kostnega mozga. Biokemijska načela njihovega delovanja so dokaj dobro razumljena. V isto kategorijo spada tudi sevalna poškodba kostnega mozga.

Druga zdravila, kot so akrihin, kloramfenikol, fenilbutazon in antikonvulzivi, ki se dajejo v običajnih terapevtskih odmerkih, lahko pri zelo malo ljudeh povzročijo aplazijo globokega kostnega mozga in te aplazije ni mogoče predvideti vnaprej. Pogosto je nepopravljiv in približno polovica bolnikov umre. V to kategorijo spada tudi zastrupitev z insekticidi, kot je DDT, in nekaterimi organskimi topili. Pogosto ni jasno, ali je anemija povezana z določenim zdravilom. Predpogoj za tak odnos je jemanje zdravil v zadnjih 6 mesecih. Najbolj znan in preučen med njimi je kloramfenikol. To zdravilo je na vrhu seznama znanih etioloških povzročiteljev v skupini bolnikov s pridobljeno aplastično anemijo, ki so jo opisali Scott et al., In v istih skupinah bolnih otrok v Shahidiju. Gurman je v Sydneyu 8 let opazoval 16 primerov, pri katerih je bila bolezen, domnevno, povezana z vnosom kloramfenikola. Absolutna incidenca aplastične anemije s smrtnim izidom pri populacijah, pri katerih ni bila znana izpostavljenost nevarnemu zdravilu in je bila znana izpostavljenost različnim zdravilom, vključno s kloramfenikolom.

Zdravljenje s kloramfenikolom poveča verjetnost za razvoj aplastične anemije za 13-krat, vendar je tudi jasno, da je to povečanje majhno. Pri drugih zdravilih je tveganje še manjše. Britanski odbor za varnost zdravil pa priporoča, da se kloramfenikol sistemsko uporablja pri vseh boleznih, razen tifusne mrzlice in hemofilnega gripnega meningitisa, šele po natančnih kliničnih in običajno laboratorijskih testih, ki kažejo, da drug antibiotik ne bo zadostoval. Nikoli se ne sme sistemsko uporabljati za banalno okužbo.

Mehanizem razvoja aplastične anemije pod vplivom kloramfenikola ni jasen. Pojav aplastične anemije ni povezan z odmerkom in trajanjem zdravljenja, prav tako ga ni mogoče razložiti z nezadostnim izločanjem pri dovzetnih posameznikih. In vitro je mogoče dokazati supresijo sinteze nukleinskih kislin v normalnih celicah kostnega mozga, vendar le pri koncentraciji zdravila, ki presega koncentracijo, uporabljeno in vivo. Predlagano je bilo, da se lahko majhne količine kloramfenikola uživajo v mleku krav, zdravljenih zaradi mastitisa, in da lahko te majhne količine preobčutite kostni mozeg na nadaljnje terapevtske odmerke. Prav tako se domneva, da obstaja neodkrita sinergija z drugimi zdravili, ki so verjetno neškodljiva, če jih uporabljamo samostojno. Ob razpravi o etiologiji pancitopenične smrtne aplazije, ki jo povzroča kloramfenikol, je treba opozoriti, da je pri pomembnem deležu bolnikov, ki prejemajo to zdravilo, povsem drugačna, reverzibilna in od odmerka odvisna depresija kostnega mozga. Pri 10 od 22 bolnikov, ki so prejemali kloramfenikol, so v zgodnjih eritroblastih kostnega mozga našli več velikih vakuol, kar je pogosto spremljalo upadanje števila eritrocitov in retikulocitov. Te spremembe izginejo teden dni po prenehanju uporabe zdravila. Očitno njihov razvoj spodbujajo povečani odmerki, zapozneli očistek iz plazme in pospešena eritropoeza. Enake vakuole lahko opazimo pri pomanjkanju fenilalanina ali riboflavina.

Kar zadeva etiologijo drugih aplazij, ki jih povzročajo zdravila, je vedno obstajala skušnjava, da bi predlagali delovanje imunskih mehanizmov, morda vrste zdravila - hapten. Vendar ti mehanizmi niso bili nikoli dokazani. Samo v eni klinični situaciji, in sicer v primeru reakcije presadka proti gostitelju pri imunološko nesposobnih dojenčkih, ki so prejeli transfuzijo, je bil ugotovljen imunološki izvor aplastične anemije. Razvoj izrazite anafilaktoidne reakcije po nenamernem večkratnem stiku z DDT pri občutljivem bolniku nakazuje tudi imunski mehanizem. Newwig je predlagal tri razlage za aplazijo zdravil: a) neposredni in toksični učinki na celice kostnega mozga, na primer po kronični industrijski izpostavljenosti benzenu; b) resnična alergija, katere manifestacije se hitro pojavijo po stiku z majhnim odmerkom; c) dolgotrajni stik z velikimi odmerki, tj. "alergija na velike odmerke". To je najpogostejša oblika. Avtor to pojasnjuje predvsem s poškodbami celičnih membran. Lahko se domneva tudi genetska nagnjenost, na kar kaže primer krvne diskrazije po stiku s kloramfenikolom pri enojajčnih dvojčkih. Pred kratkim so bili v časopisu Lancet objavljeni pregledni članki o Newwigovi medicinski aplastični anemiji.

Podobne težave se pojavijo v povezavi z virusno okužbo pred razvojem aplastične anemije. Ta pojav je dobro preučen pri nalezljivem hepatitisu. Aplastična anemija pri 5 bolnikih, starih od 4 do 19 let, se je razvila 1–7 tednov po pojavu hepatitisa. Opisanih je bilo več podobnih primerov, vključno s 3 primeri Schwartz in sod. Ti avtorji so ugotovili, da pri infekcijskem hepatitisu pogosto opazimo začasno zmanjšanje števila granulocitov, trombocitov in hemoglobina in da lahko progresivne spremembe, ki vodijo do aplazije kostnega mozga pri zelo majhnem številu bolnikov, predstavljajo nadaljevanje celotnega procesa, kar verjetno odvisna od genetske nagnjenosti. Tu lahko vidite analogijo z zastrupitvijo s kloramfenikolom. Pancitopenija s prehodno hipoplazijo kostnega mozga je bila opisana tudi v povezavi s številnimi okužbami, ki jih povzročajo virusi RNA, vključno z mikrovirusi rdečk in gripe, virusi parainfluence, mumpsom in virusi ošpic. Dve eksperimentalni virusni okužbi miši, tj. MVH-3 in trinidadski sev venezuelskega konjskega encefalitisa, povzročata pancitopenijo in hipoplazijo kostnega mozga, virus pa lahko zasejamo iz kostnega mozga. Kot pri drugih vzrokih za aplastično anemijo se tudi tu domneva avtoimunski proces.

Pri približno polovici pridobljene aplastične anemije ni zgodovine resne predhodne okužbe ali izpostavljenosti toksičnim dejavnikom. Wolf je objavil veliko gradivo, med drugim 334 primerov pridobljene pancitopenije, v 191 primerih, torej 57,2%, pa je bila anemija prepoznana kot idiopatska.

V Gurmanovem gradivu je bilo relativno število bolnikov z idiopatsko anemijo manjše, to je 28 od 104 bolnikov s pridobljeno aplazijo. V 5 od 17 primerov, ki temeljijo na Shahidijevih materialih, in v 5 od 9 primerov, ki temeljijo na Despositovem materialu, je bila anemija idiopatska. Zaenkrat še ni jasno, ali bolezni v teh primerih povzroča okužba z neidentificiranim virusom. Zdi se, da se vsaj nekateri idiopatski primeri uvrščajo v posebno skupino, ki bi ji v aplastični fazi lahko rekli predlevkemija ali levkemija.

Melhorn in drugi opisujejo 6 otrok, ki so jim na podlagi močnih, neizpodbitnih dokazov diagnosticirali aplastično anemijo v starosti od 1 leta 11 mesecev do 6 let, vendar so se vsi ti otroci pozneje po 9 tednih do 20 mesecih razvili akutno limfoblastna levkemija ... Pri teh 6 bolnikih so opazili eno skupno značilnost - hitrejši terapevtski učinek kot običajno v primerjavi z aplastično anemijo na začetnem zdravljenju s kortikosteroidi. Gurman je ugotovil enako, ta učinek pa smo opazili tudi v enem primeru, ko se je po 3 mesecih razvila akutna limfoblastna levkemija. Ta hitri odziv pancitopenije samo na zdravljenje s kortikosteroidi se močno razlikuje od običajnega pomanjkanja odziva v drugih primerih aplastične anemije. Opozoriti je treba, da je bila opisana podobna levkemična transformacija aplastične anemije, ki jo povzroča benzen in kloramfenikol.

Pridobljeni simptomi aplastične anemije

Newman in drugi so opisali 14 otrok z idiopatsko pancitopenijo in ugotovili, da poleg treh glavnih znakov - anemije, zvišane telesne temperature in purpure obstajajo pomembni negativni znaki, to je odsotnost hepatosplenomegalije, limfadenopatije, razjed na ustih in zlatenice. Lahko pa opazimo purpuro ustne sluznice in krvavitev iz dlesni. Včasih lahko pride do vnetne limfadenopatije, povezane z lokalno sepso.

Če se pri otroku razvije rdeč urin, je treba domnevati razvoj paroksizmalne nočne hemoglobinurije.

Laboratorijska diagnostika

Aminacidurija, ki jo opazimo pri približno polovici bolnikov s konstitucijsko obliko, je odsotna in kostno starost ne zaostaja.

Več kot polovica odraslih bolnikov, ki trpijo za to boleznijo, ima limfopenijo in hipogamaglobulinemijo s subnormalnimi ravnmi IgG.

{!LANG-d357b74e578267ddd72d092b11537ed5!}{!LANG-e2009804fddc9e34f9984125ba8e370e!}

{!LANG-32851d89411a118ee6565a5d7b8ffce3!}

{!LANG-1a9634c263c7fc6ce7481568a833ba59!}

Zdravljenje

{!LANG-3910c97706eed6d02782b0772df01e0d!}

{!LANG-86fc8b9b643e04289d5036ed52a22f54!}{!LANG-98af28f458ee9a6cfebc43a6b42b21b4!}

{!LANG-2ab9f717a328f0d8c9286581c5ef9b2b!}

{!LANG-fa1c71f1ad2c46161792c5648e02010a!}

{!LANG-532a7819240d50e4025045cf424ebd31!}

{!LANG-9ecaf4d87f776974380c5a221f73c3fc!}

{!LANG-6539375da8f29049adcd1d838e134dc0!}

{!LANG-54b2ccd9edb6ad663dcec32c175e1d12!}{!LANG-4e5a94a8b759f14380c63914d78b0ac5!}

{!LANG-74e87a5437dca7c9daf52401934f0c88!}{!LANG-775f2b2e33540f2131bda429b6af9d8b!}

{!LANG-c31e598fb55bfff285b5db024086d65a!}{!LANG-60ee3b92b58a995507661e26c2e77674!}

{!LANG-1c6c3de50cff62f04a59fea413ba2f39!}

{!LANG-57ce85f0eafb61ab0e6773eea96e3597!}