PNG hematologija. Bolest Markiafava-Mikeli (paroksizmalna noćna hemoglobinurija)

Nositelji patenta RU 2574968:

Izum se odnosi na medicinu, naime na laboratorijsku dijagnostiku, i može se koristiti za dijagnosticiranje paroksizmalne noćne hemoglobinurije. Zbog toga je uzorak krvi koji se proučava obojen monoklonskim antitijelima CD235a (FITC) / CD59 (PE) / CD71 (APC). Prisutnost klona PNH među eritrocitima i retikulocitima procjenjuje se odsutnošću zaštitnog proteina CD59 na membrani retikulocita izoliranim vratima CD235a, markerom pan-eritrocita i receptorom CD71 transferina. Za procjenu PNH klona među retikulocitima na CD71 + vratima sakuplja se najmanje 20 000 događaja, ovisno o CD71 + vratima, ucrtava se FSC (log) vs SSC (log) graf, na kojem se retikulociti izoliraju pomoću dodatnih CD71str vrata, čime se populacija retikulocita čisti od krhotina i dubleti metodom sekvencijalnog probiranja. U prisutnosti 100% pozitivnih na CD59 retikulocite, ocjenjuje se odsutnost PNH-klona i dijagnosticira odsutnost paroksizmalne noćne bolesti hemoglobinurije. Kad se otkrije u bolesnika sa klinički simptomi negativni CD59 retikulociti i vrijednost dobivenih pokazatelja više od 1% daju dijagnostički zaključak o prisutnosti PNH-klona i za potvrdu dijagnoze paroksizmalne noćne hemoglobinurije preporučuje se dodatno istraživanje prema međunarodnom standardiziranom protokolu. Prilikom otkrivanja negativnog za CD59 retikulocite i vrijednost dobivenih pokazatelja iznosi 0,1-1%, procjenjuje se prisutnost maloljetnog klona PNH i preporučuje se ponovno odrediti PNH klon nakon 6 mjeseci zbog povećanja njegove vrijednosti i razvoja paroksizmalne noćne hemoglobinurije, a nakon potvrde ove veličine klonu se dijagnosticira subklinički oblik paroksizmalne noćne hemoglobinurije bez klinički znakovi... Korištenje višeparametarskog spajanja CD71 + stanica omogućuje izlučivanje krhotina, dubleta i nespecifično vezanih monoklonskih antitijela. 1 bolestan

Izum se odnosi na medicinu, odnosno na kliničke i laboratorijske dijagnostičke metode, i može se koristiti za screening dijagnostiku paroksizmalne noćne hemoglobinurije (PNH).

Paroksizmalno noćna hemoglobinurija odnosi se na rijetke bolesti.

PNH je rezultat mutacije gena PIG-A. Kao rezultat, poremećena je sinteza sidra glikozilfosfatidilinnositola (GPI), koji fiksira brojne molekule na membrani krvnih stanica (uključujući CD24 na granulocitima, CD14 na monocitima, CD59 na eritrocitima i njihovim prekursorima), koji štite krvne stanice od sustava komplementa.

Na membranu eritrocita najviše utječu membrane napadajućeg kompleksa, a u nedostatku zaštitnog proteina CD59, eritrociti prolaze hemolizu.

PNH karakterizira intravaskularna hemoliza, anemija, hemoglobinurija, trombotičke komplikacije, disfagija, letargija, erektilna disfunkcija, kronično zatajenje bubrega, plućna hipertenzija.

Uz to, klon PNH može se pojaviti kod aplastične anemije, autoimune hemolitičke anemije i mijelodisplastičnog sindroma. Dobna medijana pojave PNH je 30-35 godina. Incidencija paroksizmalne noćne hemoglobinurije je od 1 do 10: 1 milijuna ljudi. Smrtnost bez liječenja paroksizmalne noćne hemoglobinurije iznosi oko 35% u roku od 5 godina od početka bolesti.

Sada su se pojavile stanične tehnologije koje su omogućile razvoj suvremene metode liječenje ove bolesti.

S tim u vezi postalo je potrebno stvoriti točne dijagnostičke metode. djelotvornost i adekvatnost liječenja ovisi o informativnosti, objektivnosti i dokazima dijagnostičkih mjera, te cjelovitosti primljenih informacija, što omogućuje procjenu prisutnosti PNH klona i razjašnjavanje dijagnoze.

Poznata metoda za otkrivanje PNH Hem metodom za dijagnozu paroksizmalne noćne hemoglobinurije (Abdulkadyrov K.M., Clinical Hematology, Handbook - St. Petersburg: Peter, 2006, str. 82), koja se temelji na poticanju inaktivacije sustava komplementa kao rezultat zakiseljavanja uzorka krvi i povećane osjetljivosti njemu eritrociti bolesnika s paroksizmalnom noćnom hemoglobinurijom. Rezultat Heminog testa ocjenjuje se vizualno.

Metoda se sastoji u činjenici da se donatorskom krvnom serumu dodaje 0,2 normalne otopine HCl, što je usporedivo sa serumom pacijenta prema sustavu antigena ABO, njegov pH seruma promijenit će se na 6,4, a time se uzrokuje aktivacija komplementa (omjer seruma i kiseline je 9: 1). Zatim se deset volumena zakiseljenog seruma pomiješa s jednim volumenom 50% suspenzije ispranih eritrocita. Zatim napravite vizualnu procjenu rezultirajuće suspenzije. S paroksizmalnom noćnom hemoglobinurijom dolazi do hemolize eritrocita i suspenzija postaje crvenkasta ili crvene boje, dok se normalni eritrociti ne hemoliziraju pod istim uvjetima.

Međutim, tehnika nema dovoljnu osjetljivost za otkrivanje manjih klonova PNH: minimalna veličina detektibilnog klona je 4,2-5%. Hemova metoda ne daje informacije o veličini klona.

Sve to ne omogućuje procjenu klona PNH kao postotka, što je, kad se tijekom probira otkriva bolest, polazna točka za naknadno praćenje i adekvatno liječenje.

Uz to, tehnika je vrlo radna i ne udovoljava suvremenim dijagnostičkim zahtjevima.

Poznata je i metoda za dijagnozu paroksizmalne noćne hemoglobinurije pomoću testa saharoze ("Problemi hematologije i transfuzije krvi", 1972., kolovoz, 17. (8) 55-7, "Procjena testa saharoze za dijagnozu paroksizmalne noćne hemoglobinurije", Idelson LI, Benisovich V.I., Savina L.S., Radzhivilovskaya E.G.).

Metoda se temelji na povećanoj osjetljivosti eritrocita pacijenta s paroksizmalnom noćnom hemoglobinurijom na proteine \u200b\u200bkomplementarnog sustava, u ovom slučaju zbog dodavanja saharoze.

Svježi donatorski serum, identičan u krvnoj grupi pacijenta, dodaje se pacijentovim eritrocitima. Eritrociti se isperu tri puta u fiziološkoj otopini (0,145 M NaCl), doda se 100 μl citrirane ili defibrinirane krvi u 900 ml otopine saharoze i inkubacija se provodi 30 minuta na 37 ° C ili 23 ° C. Zatim se epruvete centrifugiraju, a zatim se supernatant procjenjuje na vidljivu hemolizu. Ako se dogodi hemoliza, njezin se stupanj, izražen u postocima, izračunava iz koncentracije hemoglobina u supernatantu, koja se određuje metodom cijantemhemoglobina.

Uzorci cijele krvi miješaju se u omjeru 9: 1 s 3,2% otopinom natrijevog citrata ili 0,1 M oksalata, a cijela se krv defibrira dodavanjem staklene kuglice od 4 mm u 2 ml krvi. Alikvoti pune krvi i plazme bez trombocita miješaju se u različitim omjerima. Izotonična otopina saharoze priprema se otapanjem 0,27 mola posebnog reagensa saharoze u 91 ml 50 mM NaH2P04 i 9 ml NaHPO4. Ako je potrebno, pH se podešava na 6,1 s malim koncentracijama NaOH. Konačni volumen napuni se s 1000 ml vode.

Epruvete se centrifugiraju i supernatant se procjenjuje na vidljivu hemolizu. Postotak hemolize izračunata je vrijednost, izračunata iz koncentracije hemoglobina supernatanta, određene metodom cijanmethemoglobina. Dva druga alikvota, 100% hemoliza i "nulta" hemoliza (bez eritrocita), također su pripremljena za procjenu uzoraka.

Nedostatak ove metode je nedostatak osjetljivosti i specifičnosti za dijagnozu bolesti: minimalna veličina klona koja se može otkriti - 4,2-5% ne daje točnu predodžbu o veličini klona, \u200b\u200bdok u krvi pacijenta može biti prisutan pri nižim vrijednostima - manjim od 4,2%. Mane ove metode mogu se pripisati i njenoj složenosti.

Poznata je i metoda za dijagnozu PNH-klona (Rosse WF. Varijacije crvenih stanica u paroksizmalnoj noćnoj hemoglobinuriji. Br J Haematol 1973; 24: 327-42. 12), koja uključuje mjerenje i analizu stupnja hemolize u različitim koncentracijama komplementa. Ova analiza pokazuje da se PNH stanice liziraju u nižim koncentracijama od normalnih stanica.

Korištenjem ovog testa utvrđuju se populacije stanica s srednje osjetljivošću na proteine \u200b\u200bkomplementarnog sustava (tip II) između normalnih eritrocita (tip I) i abnormalnih eritrocita u paroksizmalnoj noćnoj hemoglobinuriji (tip III). Međutim, metoda je naporna i teška za standardizaciju. Male populacije abnormalnih stanica mogu se propustiti kada se koristi test.

Poznata je metoda izolacije retikulocita prema CD71 za određivanje PNH klona protočnom citometrijom među retikulocitima i granulocitima (Tsagarakis NJ, Paterakis G. Asimple test protočnog citometrija za rutinsko paroksizmalno noćno hemoglobinurijsko ispitivanje na temelju nezrelih retikulocita i granulocita 07. 259-263) (http: //onlinelibrary.wiley.coni/doi/10.1002/cyto.b.21030/full).

Pacijentu se ispituje puna krv koja se razrijedi u otopini soli puferirane s fosfatom 1: 100. U dvije epruvete doda se 50 μl razrijeđene krvi, a zatim se izvrši bojanje: u prvoj epruveti 10 μl monoklonskih antitijela (MCA) na CD71 i 20 μl MCA na CD59; U drugu epruvetu se doda 10 μl izotipične kontrole IgGl. Procjena rezultata provodi se na histogramima s jednim parametrom.

Uz to, metoda također analizira granulocite koristeći kombinacije MCA: 1) CD59-FITC / CD24-PE / CD45-PE-Cy5 /; 2) CD66b-FITC / CD16-PE / CD45-PE-Cy5.

Prema ovoj metodi, osjetljivost određivanja PNH klona među granulocitima iznosi 1%, osjetljivost određivanja PNH klona među retikulocitima je 5%. Međutim, predložena metoda ispitana je na malom broju bolesnika s paroksizmalnom noćnom hemoglobinurijom (n \u003d 8) i s klonom PNH manje od 1% (kada se procjenjuje na granulocitima i, sukladno tome, s manje od 5% kada se utvrđuje na retikulocitima) (n \u003d 7). Također, osjetljivost određivanja klona na retikulocitima (5%) ne dopušta upotrebu tehnike za istodobnu procjenu klona među granulocitima i retikulocitima. Istodobno, među uzorcima krvi pacijenata sa sumnjom na PNH nije bilo nijednog s klonom veličine 1–24%, što ne daje cjelovitu sliku korelacije vrijednosti u ovom rasponu. Ovim pristupom otežavanje retikulocita otežano je zbog odsutnosti markera pan-eritrocita (CD235a) na ploči, što je posebno potrebno za izolaciju čiste populacije i odsijecanje krhotina i dubleta. Uz to, za objektivnu procjenu PNH klona potrebno je procijeniti desetke tisuća stanica. Jedan test prema predloženoj metodi troši velik broj antitijela. Ukupan broj prikupljenih događaja vrata (prema CD71) (2000 događaja) možda neće biti dovoljan za otkrivanje klona.

Dakle, poznata metoda testirana je na malom broju bolesnika s paroksizmalnom noćnom hemoglobinurijom i PNH-klonom, a stanice će nespecifično vezane za MCA na CD71, najvjerojatnije, iskriviti rezultate analize. Uz to, za ovu analizu koristi se 6 vrsta monoklonskih antitijela, od kojih se 2 koriste dva puta, što se odražava u visokoj cijeni korištene MCA ploče. Metoda je testirana na 8 bolesnika s PNH, od kojih je 7 imalo vrijednost klona ispod praga osjetljivosti (1% za granulocite, 5% za retikulocite). Ova metoda ne rješava problem pouzdanog identificiranja manjih klonova PNH i nije dokaz visoke osjetljivosti metode.

Kao najbliži analog, poznata je metoda za dijagnosticiranje paroksizmalne noćne hemoglobinurije protočnom citometrijom, koju je predložilo Međunarodno udruženje za kliničku citometriju (ICCS). (Michael J. Borowitz, Fiona E. Craig, Joseph A. DiGiuseppe, Andrea J. Illingworth, Wendell Rosse, D. Robert Sutherland, Carl T. Wittwer, Stephen J. Richards. Smjernice za dijagnozu i praćenje paroksizmalne noćne hemoglobinurije i srodni poremećaji protočnom citometrijom, mrežno: 28. travnja 2010. DOI: 10.1002 / cyto.b.20525).

Metoda uključuje ispitivanje prisutnosti GPI vezanih proteina na granulocitima, monocitima i eritrocitima. Studija se sastoji od dvije faze: pripreme uzorka i naknadne analize na protočnom citometru.

Za analizu eritrocita, puna se krv razrijedi s PBS u omjeru 1: 100, 10 μl pune krvi doda se u 990 μl fiziološke otopine puferirane s fosfatom; Zatim se u označenu epruvetu doda 40 μl rezultirajuće suspenzije stanica. Da bi se eritrociti obojili, monoklonska antitijela konjugirana na fluorokromima obilježenim CD235FITC i PE59 obilježenim PE dodaju se u staničnu suspenziju. Nakon inkubacije s monoklonskim antitijelima tijekom 30 minuta u mraku, uzorci se isperu od nevezanih monoklonskih antitijela. Za analizu eritrocita, ispiranje se vrši dva puta centrifugiranjem uzorka u 4 ml fosfatno-fiziološkog pufera na 1500 oko 5 minuta, zatim se uzima supernatant, stanice se resuspendiraju, dodaje se 500 μl fosfatno-fiziološkog pufera za daljnju analizu.

Za prikupljanje i analizu eritrocita na protočnom citometru pomoću softvera instrumenta grade se grafikoni:

Zaplet - FS (log) vs (protiv) SS (log), u kojem je izolirana populacija eritrocita (stvarajući vrata RBC), a otpad, trombociti i agregati crvenih krvnih stanica eliminirani;

CD235a (log) vs FS (log) crta događaje s vrata RBC kako bi jasnije istaknuo CD235a pozitivnu populaciju crvenih krvnih stanica, stvorio nova vrata (CD235a +)

CD59 (zapisnik) u odnosu na CD235a, (histogram prikazuje događaje koje je zaustavio CD235a +). Histogram odražava razinu ekspresije CD59 na eritrocitima. Stanice bez nedostatka CD59 - tip I su normalni eritrociti, stanice s djelomičnim nedostatkom ekspresije CD59 - klon tipa II PNH, stanice koje ne eksprimiraju CD59, odnosno eritrociti s potpunim nedostatkom CD59 su klon tipa III PNH.

Prema metodologiji, sakupi se najmanje 50 000 citometrijskih događaja.

Da biste se pripremili za analizu granulocita i monocita, dodajte 100 μl periferne krvi u dvije označene epruvete. Nadalje, za bojanje obilježenim monoklonskim antitijelima dodajte vlastitu kombinaciju obilježenih monoklonskih antitijela u svaku epruvetu:

kombinacija obilježenih monoklonskih antitijela za određivanje PNH klona među granulocitima FLAER (AlexaFluor700) / CD15 (PE) / CD24 (PerCP) / CD45 (PE-Cy7) (markeri za zacjepljivanje: CD45 i CD15, GPI povezani markeri FLAER i CD24);

kombinacija obilježenih monoklonskih antitijela za određivanje PNH klona među monocitima FLAER (AlexaFluor700) / CD14PE / CD64PerCP / CD45PE-Cy7, gdje su markeri za prolaz CD45 i CD64, GPI su pridruženi markeri FLAER i CD14;

Obojeni uzorci inkubiraju se 30 minuta na sobna temperatura u mraku, nakon čega se uzorku dodaje 1 ml otopine za lizu kako bi se riješili eritrociti. Nakon inkubacije s otopinom za lizu, uzorci se centrifugiraju 5 minuta pri 1500 okretaja u minuti, nakon centrifugiranja supernatant se odvodi i leukociti na dnu epruvete resuspendiraju. Zatim se uzorci isperu iz otopine za lizu dodavanjem 2 ml fosfatno-fiziološke otopine u pufer i potom centrifugiranjem 5 minuta pri 1500 o / min. Nakon centrifugiranja, supernatant se dekantira, stanice se resuspendiraju, a zatim se doda 500 μl fiziološke otopine puferirane s fosfatom za daljnju analizu.

Za analizu i prikupljanje granulocita i monocita na protočnom citometru, pomoću softvera instrumenta grade se sljedeći grafikoni:

Na grafikonu CD45 (log) vs SS, područja CD45 + LY limfocita (stanice područja visoke ekspresije CD45, niske vrijednosti SS), monociti CD45 + MON (stanice područja srednje ekspresije CD45, veće vrijednosti SS) i granulociti CD45 + GRAN (stanice područja s niskom ekspresijom CD45, visokim SS vrijednostima).

Da bi se analizirao PNH klon među granulocitima, crta se graf CD 15 (log) vs SS ovisno o vratima (CD45 + GRAN). Korištenjem vrata CD15 + izolira se populacija granulocita bez krhotina i stanica koje se nisu vezale za monoklonska antitijela na CD15;

Histogram FLAER (zapisnik) u odnosu na CD24 (zapisnik) (nacrtan u odnosu na ulaz CD15 +. Ovaj grafikon ucrtava PNH GRAN vrata, koja bilježe zonu negativnu za ekspresiju CD24 i FLAER-a. Odsutnost ovih biljega na granulocitima ukazuje na to da stanice pripadaju PNH klonu.

Da bi se procijenio PNH klon među monocitima, ucrtana je krivulja -CD64 (log) vs SS u odnosu na vrata CD45 MON. Na ovom su grafikonu pozitivni događaji C064 ograničeni na vrata CD64 + MON. Ovisno o CD64 + MON vratima, crta se grafikon -FLAER (log) u odnosu na CD14 (log) (ovisno o odabranoj populaciji CD64 + monocita - vrata). Na ovom grafikonu izgrađena su PNH MON vrata koja pokrivaju zonu, negativnu za ekspresiju CD14 i FLAER. Odsutnost ovih biljega na monocitima ukazuje na to da stanice pripadaju PNH klonu.

Vrijednost PNH klona predstavlja postotak stanica (granulocita, monocita, eritrocita) među kojima nema sidrenih proteina povezanih s GPI.

Istraživanje klona PNH prema međunarodnom protokolu je "zlatni standard" u dijagnozi PNH. Međutim, istraživanje je skupo i dugotrajno. Priprema i analiza prema ovoj metodi traje najmanje 2,5-3 sata.

S obzirom na činjenicu da je PNH rijetka bolest, prema različitim izvorima, pogađa od 1 do 10 ljudi na 1 milijun stanovništva, većina pacijenata upućenih na dijagnozu klonova PNH neće biti pozitivni PNH. Stoga je mučna i skupa analiza prema međunarodnom protokolu neprimjerena za pacijente bez PNH, a dovoljno je odgovoriti na pitanje je li klon PNH prisutan ili nije. S cijenom obilježenih monoklonskih protutijela koja počinju od 500 USD za jednu stavku, puni set antitijela i reagensa za PNH dijagnostiku prema međunarodnom pristupu koštat će od 5000 USD. Uzimajući u obzir kratak vijek trajanja nekih potrebnih reagensa, čak i u gradu s populacijom od milijun ljudi, godišnje se jednim priborom može pregledati od 10 do 100 pacijenata, cijena jedne studije može doseći i do 500 američkih dolara.

Cilj izuma je stvoriti točnu, osjetljivu i na dokazima utemeljenu metodu za laboratorijsku dijagnozu paroksizmalne noćne hemoglobinurije, koja je jednostavna za izvođenje, pristupačna i omogućava screening paroksizmalne noćne hemoglobinurije s minimalnim materijalnim troškovima.

Suština izuma leži u činjenici da u metodi laboratorijske dijagnoze paroksizmalne noćne hemoglobinurije, uključujući bojanje pune krvi pacijenta monoklonskim antitijelima u fiziološkoj otopini puferiranoj s fosfatom, inkubaciju, pranje krvnih stanica od nevezanih monoklonskih antitijela centrifugiranjem, resuspenzijom gotovog uzorka ili naknadnom procjenom veličine klona njegova odsutnost u programu protočnog citometra zbog odsutnosti ili prisutnosti zaštitnih proteina, trikolorna kombinacija monoklonskih antitijela CD235a (FITC) / CD59 (PE) / CD71 (APC), koja se dodaje u epruvetu s uzorkom, prisutnost PNH klona među eritrociti i retikulociti procjenjuju se odsutnošću zaštitnog proteina CD59 na membrani retikulocita izoliranih vratima CD235a - markerom pan-eritrocita i receptorom CD71-transferina; za procjenu PNH klona među retikulocitima na vratima CD71 + sakuplja se najmanje 20 000 događaja, ovisno o CD71 + vratima grafikon FSC (log) vs SSC (log), na kojem se izoliraju retikulociti pomoću dodatnih vrata CD71str, čime se populacija retikulocita očisti od otpadaka i dubleta metodom sekvencijalnog zabijanja, dobivene vrijednosti pokazatelja uspoređuju se s kriterijima norme, te u prisutnosti 100% pozitivnih Ocjenjuje se da CD59 retikulociti nemaju PNH klon i dijagnosticira se odsutnost paroksizmalne noćne hemoglobinurije. Ako se otkrije pacijent s kliničkim simptomima negativnih CD59 retikulocita i vrijednost dobivenih pokazatelja više od 1%, daju dijagnostički zaključak o prisutnosti PNH-klona i za potvrdu dijagnoze paroksizmalne noćne hemoglobinurije, preporučuje se dodatno istraživanje prema međunarodnom standardiziranom protokolu, pri otkrivanju negativnog za CD59 retikulocite i vrijednost Dobiveni pokazatelji od 0,1-1% procjenjuju prisutnost manjeg PNH klona i preporučuju ponovno određivanje PNH klona nakon 6 mjeseci radi povećanja njegove vrijednosti i razvoja paroksizmalne noćne hemoglobinurije; kada se potvrdi ta veličina klona, \u200b\u200bdijagnosticira se subklinički oblik paroksizmalne noćne hemoglobinurije bez kliničkih znakova ...

Upotreba izuma omogućuje postizanje sljedećih tehničkih rezultata.

Predložena metoda za otkrivanje PNH klona ima visoku pouzdanost, točnost i osjetljivost - 0,1%, usporedivu s međunarodnom standardiziranom metodom, i temelji se na dokazima.

Omogućuje utvrđivanje prisutnosti PNH klonova obje značajne veličine kod bolesnika s istinskom paroksizmalnom noćnom hemoglobinurijom i manjih - od 0,01 do 1%, kod bolesnika s aplastičnom anemijom i mijelodisplastičnim sindromom.

Metoda je jednostavnija u primjeni, ne zahtijeva velike materijalne troškove u usporedbi s međunarodnom standardiziranom metodom.

Tehnologija za određivanje PNH klona omogućuje upotrebu minimalnog broja (tri) monoklonskih antitijela u PNH probiranju (CD235a, CD71, CD59).

Za proučavanje krvi jednog pacijenta koristi se samo jedna epruveta, što također pojednostavljuje i ubrzava analizu.

Vrijeme provedeno na jednom testu je 40-50 minuta. Korištenje manjeg broja antitijela bez upotrebe otopina za lizu čini pojeftinjenje testa za oko 75% po testu. Istodobno se održavaju visoka osjetljivost i dijagnostička točnost.

U većini slučajeva, metodom se izbjegavaju dodatni troškovi povezani s upotrebom više antitijela, jer je, s obzirom na rijetku pojavu bolesti, rezultat često negativan. Tehnika je vrlo pogodna za pregled pacijenata i dostupna je medicinskim ustanovama različitih profila, kao i svim kategorijama građana.

Krajnji rezultat analize u predloženoj metodi predstavljen je u obliku postotka eritrocita i retikulocita s defektom u GPI-povezanim proteinima, odnosno PNH klonu. Tehnika omogućuje utvrđivanje povećanog rizika od stvaranja tromba, na temelju postotka identificiranog PNH klona.

Predložena metoda je poželjnija u usporedbi s nekim drugim poznatim metodama - Hemovim testom, testom saharoze, mjerenjem stupnja hemolize pri različitim koncentracijama proteina sustava komplementa.

Tehnički rezultat postignut je novom tehnologijom koju su autori razvili za određivanje PNH klona u paroksizmalnoj noćnoj hemoglobinuriji pomoću protočne citometrije, čiji algoritam predviđa određivanje ovog klona na retikulocitima i eritrocitima (za razliku od standardnog koji se određuje na neutrofilima, monocitima i eritrocitima). U ovom slučaju autori prvi put koriste kombinaciju antitijela CD235a (FITC) / CD59 (PE) / CD71 (APC). Prema predloženoj metodi, u vrijeme analize podataka koristi se dodatni postupak multiparametrijskog zatvaranja CD71 + stanica i isključivanje iz analize krhotina, dubleta i zbrinjavanja nespecifično vezanih monoklonskih antitijela.

Ključna je točka provesti istraživanje retikulocita koji su, prema tehnologiji koju su razvili autori, izolirani pomoću antitijela na CD71 i ispitivani pomoću kombinacije tri monoklonska antitijela CD235a (FITC) / CD59 (PE) / CD71 (APC) po izboru autora. PNH klon među retikulocitima odražava istinsku vrijednost PNH klona; autori su dobivene klonove PNH među retikulocitima uspoređivali s vrijednostima dobivenim standardiziranim međunarodnim pristupom dijagnozi PNH. Korelacija volumena PNH pozitivnih retikulocita s monocitima je 0,95, s granulocitima - 0,93. Prema predloženoj metodi, postotak PNH pozitivnih eritrocita mjeri se s većom osjetljivošću u odnosu na međunarodni standardizirani pristup, jer pomoću predložene metode ispituje se najmanje 1.000.000 eritrocita, a prema ICCS-u samo 500.000.

Po prvi puta je PNH klon proučavan na retikulocitima koristeći kombinaciju monoklonskih antitijela CD235a / CD71 / CD59, što je omogućilo procjenu veličine ovog klona s osjetljivošću od 100%.

Kao rezultat toga, postalo je moguće pregledati PNH pomoću tri monoklonska antitijela. Korištenje dodatnog stupnja izolacije retikulocita i "odsijecanja" stanica nespecifično vezanih za monoklonska antitijela (na grafikonu FS vs SS, slika) daju točan rezultat, koji omogućuje na temelju probira potvrđivanje dijagnoze PNH i provođenje učinkovitog adekvatnog liječenja.

Postupak se provodi na sljedeći način.

Za ispitivanje se pacijentovoj venskoj krvi uzima u epruvetu s K2 EDTA antikoagulansom. Epruveta se dostavlja u laboratorij iz prostorije za liječenje medicinske i profilaktičke ustanove (LPU).

Za analizu eritrocita i retikulocita, cijela se krv razrjeđuje u zasebnoj polistirenskoj epruveti. Za razrjeđivanje fiziološkom otopinom puferiranom u fosfatnom omjeru u omjeru 1:10, 50 μl pune krvi doda se u 450 μl fiziološke otopine puferirane fosfatom i temeljito miješa 5 sekundi na vrtlogu, a zatim se u označenu epruvetu unese 40 μl nastale suspenzije stanica.

Za bojenje uzorka koristi se trobojna kombinacija monoklonskih antitijela - CD235a (FITC) / CD59 (PE) / CD71 (APC). Bojenje se provodi dodavanjem 3 μl obilježenih monoklonskih antitijela u uzorak, nakon čega se epruveta mućka 5 sekundi na vrtlogu. Zatim se inkubacija provodi 15 minuta u mraku na sobnoj temperaturi.

Zatim se krvne stanice isperu dva puta u 4 ml fiziološke otopine puferirane fosfatom u načinu centrifugiranja tijekom 5 minuta na frekvenciji od 1500 o / min. Nakon svakog centrifugiranja pipetom, pažljivo sakupljajte supernatant tako da stanice ostanu na dnu cijevi.

Gotov uzorak resuspendira se 5 sekundi na vrtlogu i doda se 750 μl PBS, nakon čega je uzorak spreman za analizu na protočnom citometru.

Zatim se rezultati procjenjuju i bilježe pomoću višebojne protočne citometrije. Analiza se može provesti na bilo kojem protočnom citometru opremljenom detektorima za najmanje tri fluorescentna kanala.

Mjerenja se provode na protočnom citometru BD FACSCanto ™ II Becton-Dickinson (SAD).

Procjena prisutnosti ili odsutnosti PNH klona na eritrocitima i retikulocitima, kao i veličina PNH klona, \u200b\u200bprovodi se na protočnom citometru pomoću posebnog softvera.

Da bi se procijenio PNH klon među eritrocitima i retikulocitima, crta se grafikon - FSC (log) vs SSC (log), koristeći logično ograničenje, izolira se područje eritrocita, isključujući krhotine i dublete (slika 1a).

Zatim, na FSC grafikonu (log) u odnosu na CD235a (slika 1b) izgradite vrata CD235a +, čime ograničavajući pozitivne stanice i eliminirajući događaje nespecifično vezane za CD235a (kuglice i stanice koje ne pripadaju populaciji CD235a +).

Događaji uključeni u ulaz CD235a + analiziraju se na grafikonu CD71 vs FSC (log) (slika 1e), a na njemu je istaknuta pozitivna populacija CD71.

Za objektivnu procjenu PNH klona među retikulocitima, najmanje 20 000 događaja prikupljeno je u CD71 + kapiji.

Ovisno o vratima CD71 + FSC gradi graf (log) vs SSC (log) (slika 1f), na kojem su s dodatnim vratima CD71str izolirani retikulociti i tako konačno uzastopno pročišćavanje populacije dubleta i ostataka.

Dalje se crta graf CD235a u odnosu na CD59 (slika 1g) u odnosu na vrata CD71str (izolirani retikulociti). Na ovom se grafikonu razlikuju dva područja Norm ° Ret i PNH ° Ret (slika 1g), to su granice normalnih, odnosno PNH pozitivnih retikulocita. Statistički podaci izraženi su u apsolutnim vrijednostima i% prolaza (slike 1d i 1h).

Protokoli za prikupljanje podataka postavljaju se jednom, a kasnije su potrebne samo manje prilagodbe.

Vrata CD235a + u prvoj fazi prikupljanja podataka su zaustavna vrata, tj. prikuplja 1.000.000 događaja. Vrata CD235a + primijenjena su na graf CD235a u odnosu na CD59 (slika 1c). Ako nema više od 10 događaja u regijama PNH tipa II i PNH tipa III na grafikonu CD235a vs CD59, prikupljanje podataka se zaustavlja i donosi se zaključak da klona PNH nema.

S većim brojem događaja u tim regijama, istraživanje se nastavlja.

Klon PNH među retikulocitima je postotak retikulocita kojima nedostaje zaštitni protein CD59.

U prisutnosti 100% pozitivnih na CD59 retikulocite, ocjenjuje se odsutnost PNH-klona i dijagnosticira odsutnost paroksizmalne noćne hemoglobinurije.

Ako se identificira pacijent s kliničkim simptomima negativnih CD59 retikulocita i vrijednost dobivenih pokazatelja više od 1%, daju se diagnostički zaključak o prisutnosti PNH-klona i za potvrdu dijagnoze paroksizmalne noćne hemoglobinurije preporučuje se dodatno istraživanje prema međunarodnom standardiziranom protokolu (Michael J. Borowitz, Fiona E. Craig , Joseph A. DiGiuseppe, Andrea J. Illingworth, Wendell Rosse, D. Robert Sutherland, Carl T. Wittwer, Stephen J. Richards. Smjernice za dijagnozu i praćenje paroksizmalne noćne hemoglobinurije i srodnih poremećaja protočnom citometrijom).

Ako se negativno ne otkriju CD59 retikulociti i vrijednost dobivenih pokazatelja iznosi 0,1-1%, procjenjuje se prisutnost manjeg klona PNH. U ovom slučaju, preporučuje se ponovno odrediti PNH klon nakon 6 mjeseci radi povećanja njegove vrijednosti i razvoja paroksizmalne noćne hemoglobinurije.

Kada se ta veličina klona potvrdi protočnom citometrijom prema međunarodnom protokolu, dijagnosticira se subklinički oblik paroksizmalne noćne hemoglobinurije bez kliničkih znakova ili se sudi PNN-ovom klonu istodobno s AA i MDS-om nakon postavljanja odgovarajućih dijagnoza prema preporukama Međunarodne interesne skupine za PNH (I-PIG).

Metoda je prošla klinička ispitivanja na Odjelu za kliničku laboratorijsku dijagnostiku Ruske medicinske akademije poslijediplomskog obrazovanja. Ispitali smo 572 pacijenta upućena iz različitih zdravstvenih ustanova s \u200b\u200bpreliminarnom dijagnozom ili sumnjom na paroksizmalnu noćnu hemoglobinuriju (PNH), aplastičnu anemiju (AA), mijelodisplastični sindrom (MPS), autoimunu hemolitičku anemiju (AIHA), u dobi od 12 do 82 godine.

Svi su pacijenti podvrgnuti dijagnostici prema predloženoj metodi metodom višebojne protočne citometrije, kao i prema međunarodnom standardiziranom pristupu.

Određena je odsutnost zaštitnog proteina CD59 na membrani retikulocita izoliranih CD235a (pan-eritrocitni marker) i CD71 (receptor za transferin) i dodatno pročišćenih sekvencijalnom metodom kapiranja prema FS / SS parametrima rasipanja svjetlosti; metoda s PNH-klonom među granulocitima i monocitima, mjerena prema međunarodnom standardiziranom pristupu.

Pregledane su 572 osobe u dobi od 15 do 64 godine, od čega 248 muškaraca i 324 žene. Od 572 ispitana, PNH klon pronađen je u 175 bolesnika, vrijednosti su se kretale od 0,1% do 99,7% (medijan 41,6%). Među njima je 78 muškaraca i 97 žena. Svi su pacijenti podvrgnuti paralelnim studijama klona PNH prema međunarodnom standardiziranom pristupu i korištenjem predložene metode. Korelacija između vrijednosti klona PNH među retikulocitima i granulocitima iznosila je 0,93, među retikulocitima i monocitima 0,95. Osjetljivost metode bila je 98,9%, specifičnost 99,8%, a ukupna točnost 99,7%.

U osnovi, kod aplastične anemije i mijelodisplastičnog sindroma, PNH-klon je manji od 1%. Prema preporukama, klonove ove veličine treba proučavati u dinamici s učestalošću 1 puta u 6 mjeseci. S povećanjem veličine klona i odgovarajućih kliničkih znakova, govorimo o postavljanju dijagnoze PNH.

Primjer. Pacijent M., 34 godine, bio je pod nadzorom hematologa. Nakon što su preboljeli akutne respiratorne virusne infekcije, primijećen je porast slabosti, žutica i potamnjenje mokraće.

Pacijent je primljen na odjel medicinske i preventivne ustanove (LPU) s pritužbama na slabost i potamnjenje mokraće.

Planirani pregled obavljen je u ambulanti medicinske ustanove. Objektivnim pregledom otkriven je ikterus kože i vidljive sluznice. Pacijent je primljen na odjel hematologije s pritužbama na opću slabost, malaksalost, otežano disanje, tahikardiju, taman urin, smanjeni broj hemoglobina i eritrocita.

Epruveta s uzorkom periferne krvi stabilizirane K2 EDTA poslana je Odjelu za kliničku laboratorijsku dijagnostiku Ruske medicinske akademije poslijediplomskog obrazovanja u Referentnom centru PNH radi identifikacije klona PNH protočnom citometrijom. Analiza PNH klona među granulocitima, monocitima i eritrocitima rađena je prema međunarodnom protokolu, a proučavanje PNH klona provedeno je predloženom metodom na eritrocitima i retikulocitima.

Istodobno, PNH klon proučavan je prema međunarodnom protokolu i prema predloženoj metodi (ponavljanje prethodne rečenice!). Prema međunarodnom protokolu, uzorak je bojen kako bi se identificirao PNH klon među granulocitima, monocitima i eritrocitima, a prema metodi koju su autori predložili za otkrivanje PNH klona među eritrocitima i retikulocitima. Prema predloženoj metodi, uzorak je obojen monoklonskim antitijelima na CD235a (FITC) / CD59 (PE) / CD71 (APC) dodavanjem naizmjenično u 40 μL 1:10 razrijeđene pune krvi.

Nakon 15 minuta inkubacije u mraku, stanice su isprane dva puta u 4 ml fiziološke otopine puferirane fosfatom u načinu centrifugiranja tijekom 5 minuta na frekvenciji od 1500 o / min.

Nakon svakog centrifugiranja uzet je supernatant, dok su stanice ostale na dnu epruvete.

Pripremljeni uzorak resuspendira se 5 sekundi na vrtlogu i doda se 750 μl PBS.

Za proučavanje eritrocita i retikulocita, područje eritrocita, isključujući krhotine i dublete, istaknuto je na grafikonu FSC (log) vs SSC (log).

FSC (log) u odnosu na CD235a ploča tada je istaknuo CD235a - pozitivne stanice isključujući krhotine i stanice koje nisu CD235a + koje su nespecifično vezale anti-CD235a monoklonska antitijela. Događaji uključeni u vrata CD235a + analizirani su na grafikonu CD71 vs FSC (log) i identificirana je populacija pozitivna na CD71.

Za objektivnu procjenu PNH klona među retikulocitima, najmanje 20 000 događaja prikupljeno je u CD71 + vrata.

FSC (log) vs SSC (log) crtali su se ovisno o CD71 + vratima. Zatim je na ovom grafikonu izolirana populacija retikulocita pomoću dodatnih vrata CD71str, koja su tako očišćena od krhotina i dubleta metodom uzastopnog zabijanja.

Nadalje, na grafikonu CD235a naspram CD59, ovisno o CD71str kapiji (izolirani retikulociti), retikulociti su procijenjeni na prisutnost GPI-vezanog proteina CD59 na membranama retikulocita, odnosno PNH-pozitivne i PNH-negativne stanice. Statistika je prikazana u apsolutnim vrijednostima i% ulaza.

Izolacijom retikulocita CD71 i naknadnim pročišćavanjem od krhotina, stanice CD59 populacije iznosile su 97,6%. Dakle, korištenjem predložene metode pronađen je PNH klon.

Studija u skladu s međunarodnim protokolom za otkrivanje PNH potvrdila je da je klon PNH prisutan na granulocitima, monocitima i eritrocitima u količini od 99,2%, 97,6%, odnosno 71,0%, što ukazuje na ponovljivost rezultata predloženih i standardnih metoda. Ovaj test poslužio je kao osnova za dijagnozu paroksizmalne noćne hemoglobinurije.

Klinička ispitivanja pokazala su da predložena metoda ima visoku pouzdanost, točnost i osjetljivost (0,1% PNH-klona), omogućuje utvrđivanje prisutnosti i visokih vrijednosti klona u bolesnika s paroksizmalnom noćnom hemoglobinurijom i manjih vrijednosti (od 0,1%) u bolesnici s aplastičnom anemijom, mijelodisplastičnim sindromom. Predložena tehnika jednostavna je za izvođenje, ne zahtijeva velike materijalne troškove, jedan test traje 40-50 minuta.

Tehnika je vrlo pogodna za pregled pacijenata i dostupna je medicinskim ustanovama različitih profila, kao i svim kategorijama građana.

Metoda za laboratorijsku dijagnozu paroksizmalne noćne hemoglobinurije, uključujući bojanje pune krvi pacijenta monoklonskim antitijelima u fiziološkoj otopini puferiranoj s fosfatom, inkubaciju, pranje krvnih stanica od nevezanih monoklonskih antitijela centrifugiranjem, naknadnu procjenu veličine klona ili njegove odsutnosti u programu protočnog citometra ili prisutnost zaštitnih proteina, naznačena time što se trobojna kombinacija monoklonskih antitijela CD235a (FITC) / CD59 (PE) / CD71 (APC), koja se dodaje u epruvetu za uzorkovanje, koristi za bojanje uzorka krvi koji se proučava, procjenjuje se prisutnost PNH klona među eritrocitima i retikulocitima odsustvom zaštitnog proteina CD59 na membrani retikulocita izoliranih vratima CD235a - marker pan-eritrocita i CD71 - receptor za transferin, za procjenu PNH klona među retikulocitima u CD71 + vratima, sakupi se najmanje 20 000 događaja, ovisno o CD71 + vratima, ucrtava se FSC (log) graf vs SSC (log), na kojem se izoliraju retikulociti pomoću dodatnih vrata CD71str, čime se populacija retikulocita očisti od otpadaka i dubleta metodom sekvencijalnog zabijanja, dobivene vrijednosti se uspoređuju s normalnim kriterijima, a u prisutnosti 100% pozitivnih CD59 retikulocita ocjenjuje se odsutnost PNH -kloniraju i dijagnosticiraju odsutnost bolesti paroksizmalne noćne hemoglobinurije, ako se otkrije pacijent s kliničkim simptomima negativnih CD59 retikulocita i vrijednost dobivenih pokazatelja bude veća od 1%, daju dijagnostički zaključak o prisutnosti PNH-klona i za potvrdu dijagnoze paroksizmalne noćne hemoglobinurije preporučuje se dodatnom međunarodnom protokolu, a prema međunarodnom protokolu preporučuje se dodatni međunarodni protokol. , prilikom otkrivanja negativnog za CD59 retikulocite i vrijednost dobivenih pokazatelja iznosi 0,1-1%, prosuđuju prisutnost maloljetnog PNH klona i preporučuju ponovno određivanje klona PNH nakon 6 mjeseci zbog povećanja njegove vrijednosti i razvoja paroksizmalnog intramuralna hemoglobinurija, kada se potvrdi ova veličina klona, \u200b\u200bdijagnosticira se subklinički oblik paroksizmalne noćne hemoglobinurije bez kliničkih znakova.

Slični patenti:

Izum se odnosi na medicinu, odnosno na oftalmologiju, i može se koristiti za dijagnozu nasljednih optička neuropatija (NE). U tu svrhu provode se klinička i citološka ispitivanja, a osim toga iz kože pacijenta dobiva se kultura fibroblasta gustoće od 5000-10000 stanica po cm2, obojena mitohondrijskim fluorescentnim bojom TMRE ovisno o naponu do konačne koncentracije od 25 nM.

Izum se odnosi na medicinu i opisuje kemiluminescentni reagens za određivanje prisutnosti i / ili količine analita u uzorku s očekivanim sadržajem analita, pri čemu je reagens nedisperzibilan i topiv u vodenom mediju te sadrži vezivnog partnera za analit i kemiluminescentni sastav koji sadrži olefinski spoj i metalni kelat, pri čemu je olefinski spoj spoj koji može reagirati s dodavanjem singlet kisika 2 + 2 da bi se stvorio dioksetan ili koji je sposoban reagirati s singlet kisikom sa 4 + 2 cikloadicijom s dienima, a gdje je metal ili metalni kelat rijetki zemljani metal ili metal Skupina VIII, i gdje je metal koordiniran s dva ili više atoma iste molekule ili helatnog sredstva, gdje su dva ili više atoma odabrani iz skupine koja se sastoji od kisika, dušika i sumpora.

Skupina izuma odnosi se na medicinu, naime na imunologiju, i može se koristiti za određivanje ex-vivo učinkovitosti liječenja karcinoma. U tu svrhu, nakon primjene jedne ili više doza imunogenog sastava subjektu, mjeri se razina aktiviranih T-limfocita (CD3 + CD69 +) u tijelu.

Izum se odnosi na područje biotehnologije i može se koristiti za određivanje humanog genotipa polimorfizmom u genskoj matrici metaloproteinaze MMP9-1562 C\u003e T (rs3918242).

Izum se odnosi na postupak za određivanje biološke aktivnosti embrionalnih jajašaca Trichuris. Opisana metoda uključuje izvođenje najmanje 3 analize odabrane između: - procjene i / ili potvrde faze embrionalnog razvoja jajašaca kvantitativnom PCR metodom pomoću prikladnih markerskih sekvenci za određivanje broja kopija genomske DNA, - procjene metaboličke aktivnosti embrionalnih jajašaca korištenjem biokemijske i / ili molekularno-biološke metode, - procjena inducibilnosti ekspresije gena u embrionalnim jajima, - procjena pokretljivosti ličinki Trichursa pomoću mikroskopa tijekom duljih razdoblja promatranja nakon predinkubacije na povišenim temperaturama i / ili - procjena stope izvaljenosti ličinki Trichuris u laboratorijskoj životinji ...

Izum se odnosi na medicinu, naime na kardiologiju, i može se koristiti za predviđanje rizika od kardiovaskularne smrtnosti u bolesnika s postinfarktnim kroničnim zatajenjem srca, u kombinaciji s šećerna bolest 2 vrste.

Izum se odnosi na medicinu, naime na onkologiju i kliničku biokemiju. Bit metode je u tome da se fiksirane stanice periferne krvi tretiraju primarnim antitijelima na protein koji veže estrogen koji specifično komuniciraju s antigenima na površini segmentiranih granulocita, zatim se sekundarna anti-vrsta fluorescentno obilježena antitijela dodaju u nastali kompleks antigen-antitijelo i u prisutnosti bojenja površine segmentiranih granulocita dijagnosticiraju se granulociti maligne novotvorine, a u nedostatku bojenja površine segmentiranih granulocita, dijagnosticiraju se benigne novotvorine.

Izum se odnosi na medicinu, naime na onkologiju, i može se koristiti za predviđanje razvoja hematogenih metastaza nakon kombiniranog liječenja raka bubrega.

Izum se odnosi na medicinu, naime na porodništvo i ginekologiju, i može se koristiti za predviđanje zastoja u intrauterinom rastu fetusa. Za to se u venskoj krvi žene u ranoj trudnoći određuje relativni sadržaj CD3 + CD16 + 56 + limfocita, razina C3 komponente komplementa i topivi receptor faktora nekroze tumora (sTNF-R).

Izum se odnosi na medicinu, naime na gastroenterologiju, i može se koristiti za dijagnozu suppurativne postnekrotične pseudociste gušterače. Zbog toga se aktivnost fagocita određuje u krvi pacijenta razinom ekspresije CD 14 + / HLA-DR + protočnom citometrijom i statističkom ROC analizom. Ako je sadržaj CD14 + / HLA-DR + ispod 85%, dijagnosticira se suppurativna postnekrotična pseudocista gušterače. Korištenje ove metode omogućuje dijagnozu suppurativne postnekrotične pseudociste gušterače, što omogućuje određivanje taktike upravljanja takvim pacijentima i odabir kirurškog zahvata. 2 bivša, 1 tablica

Izum se odnosi na medicinu, odnosno na hematološku onkologiju, i može se koristiti za predviđanje razvoja preživljavanja bez recidiva bolesti u bolesnika s multiplim mijelomom nakon autologne transplantacije krvotvornih matičnih stanica. Cilj izuma je pojednostaviti metodu za predviđanje preživljavanja bez bolesti u bolesnika s multiplim mijelomom nakon ATHSC. Metoda za predviđanje preživljavanja bez relapsa u bolesnika s multiplim mijelomom nakon autologne transplantacije krvotvornih matičnih stanica (ATHSC) uključuje protočnu citometriju i procjenu relativnog sadržaja jedne od populacija limfocita koristeći njezinu graničnu vrijednost. U predloženoj metodi, nakon postupka afereze, prije transplantacije, u produktu afereze pacijenta određuje se relativni broj CD45 + CD19 + B stanica, a ako je sadržaj CD45 + CD19 + B stanica veći od 2,5%, predviđa se kraće razdoblje preživljavanja bez recidiva nakon ATHSC i sa sadržajem CD45 + CD19 + B stanice manje od 2,5% predviđaju duže preživljavanje bez bolesti nakon ATHSC. 1 bolestan.

Izum se odnosi na medicinu, naime na imunologiju, i može se koristiti za procjenu reakcije blast transformacije limfocita. Za to se brucelin koristi za specifičnu aktivaciju limfocita. Otkrivanje blast oblika limfocita provodi se pomoću monoklonskih antitijela na CD34, nakon čega slijedi brojanje stanica protočnom citometrijom. Korištenje ove metode omogućuje računovodstvo limfitocita aktiviranih brucelinom u RBTL-u pomoću monoklonskih antitijela CD34 u bolesnika s brucelozom i zdravih darivatelja. 1 kartica.

Izum se odnosi na medicinu, naime na imunologiju, i može se koristiti za određivanje antitijela na alogeni HLA-G u krvnom serumu. Za to se koristi test unakrsnog podudaranja mononuklearnih stanica davatelja sa serumom primatelja. Subpopulacije mononuklearnih stanica analiziraju se protočnom citometrijom na vezivanje monoklonskih protutijela HLA-G, a stupanj ekspresije HLA-G procjenjuje se na eksperimentalnim i kontrolnim donornim mononuklearnim stanicama. Istodobno su značajne subpopulacije CD3-HLA-G + i CD3 + HLA-G +, prema kojima se koeficijent suzbijanja (CP) u eksperimentalnom okruženju izračunava u odnosu na kontrolni prema formuli: CP HLA-G \u003d (HLA - G O P - HLA - G K ON T) HLA - G K ON T × 100, gdje je HLA-Gon ukupan relativni broj subpopulacija koje izražavaju HLA-G: (CD3-HLA-G ++ CD3 + HLA-G +) u eksperimentalnom okruženju,%; HLA-Gcont je ukupan relativni broj subpopulacija koje izražavaju HLA-G: (CD3-HLA-G ++ CD3 + HLA-G +) u kontrolnoj postavci,%. U ovom slučaju, prisutnost senzibilizacije na alogeni HLA-G dijagnosticira se s negativnom vrijednošću CPHLA-G. Korištenje ove metode omogućuje otkrivanje alogene senzibilizacije na HLA-G pomoću protočne citometrije, određujući subpopulacije CD3-HLA-G + i CD3 + HLA-G +. 3 pr., 3 gl., 2 tbl.

Izum se odnosi na medicinu, naime na porodništvo i ginekologiju, i može se koristiti za predviđanje ponavljanja prijetnje pobačaja. U tu se svrhu provodi imunološka studija periferne venske krvi u 7-12 tjednu trudnoće kod žena s prijetnjom pobačaja. Nakon liječenja prijetnje prekidom trudnoće, određuje se relativni sadržaj CD45RA-CD62L- u populaciji CD8 + limfocita. Ako je njegova vrijednost veća od 23,9%, predviđaju pojavu prijetećeg pobačaja u drugom tromjesečju u žena s anamnezom ponavljajućeg pobačaja. Korištenje ove metode omogućuje predviđanje ponavljanja prijetnje pobačaja u drugom tromjesečju trudnoće, što će omogućiti odabir ispravnih taktika upravljanja trudnicom i smanjenje učestalosti ove komplikacije. 1 tbl, 4 pr

Izum se odnosi na medicinu, naime na transfuziologiju, i može se koristiti za kontrolu učinkovitosti zračenja donatorske krvi. Metoda uključuje postavljanje reakcije blast-transformacije krvnih stanica s mitogenim fitohemaglutininom i uzimajući u obzir rezultate reakcije određivanjem indeksa stimulacije limfocita. Reakcija se provodi u odnosu na ozračenu donatorsku krv, a rezultati se bilježe protočnim citometrom koristeći monoklonska antitijela obilježena različitim fluorokromima, obnavljajući aktivirane limfocite sa smanjenom ekspresijom općeg markera leukocita CD45 i određujući među njima postotak dvostruko negativnih T-limfocita s imunofenotipom CD3 CD4-CD8-, dok se za kontrolu uzima neozračeni uzorak iste krvi. Nakon toga se učinkovitost ozračivanja određuje omjerom sadržaja dvostruko negativnih T-limfocita s imunofenotipom CD3 + CD4-CD8- u ispitivanoj ozračenoj i istoj neozračenoj kontrolnoj krvi kao Eob \u003d Cdntlo-Sdntlk, gdje je Eob učinkovitost ozračenja, Cdntlo je postotak dvostruke- negativni T-limfociti s CD3 + CD4-CD8- imunofenotipom u eksperimentu (u ispitivanoj ozračenoj krvi), Sdntlc - postotak sadržaja dvostruko negativnih T-limfocita s CD3 + CD4-CD8- imunofenotipom u kontroli (u neozračenom uzorku iste krvi). S razlikom od kontrole veće od 50%, donosi se zaključak o funkcionalnoj inferiornosti T-limfocita u ozračenoj krvi i imunološkoj sigurnosti ovog krvnog proizvoda za primatelja. Upotreba ove metode omogućuje utvrđivanje učinkovitosti zračenja donatorske krvi protočnom citometrijom.

Izum se odnosi na medicinu, naime na porodništvo i ginekologiju, i omogućuje predviđanje prijetećeg pobačaja kod trudnica. Za to se u razdoblju od 5-12 tjedana trudnoće određuje relativni broj CD178 + monocita gestacije u perifernoj venskoj krvi. Ako je njegova vrijednost jednaka 37,7% ili manje u monocitnim vratima, predviđa se prijetnja kasnim pobačajem kod žena s prijetnjom prekida trudnoće rani datumi i povijest ponovljenih pobačaja. Korištenje ove metode omogućuje vam odabir ispravne taktike vođenja trudnoće, provođenje kompleksa terapijskih i profilaktičkih mjera i smanjenje rizika od komplikacija i nepovoljnih ishoda trudnoće u skupini žena s visokim rizikom pobačaja. 3 bivša, 1 tablica

Izum se odnosi na medicinu, naime na porodništvo, i odnosi se na odabir taktike za upravljanje trudnicama s placentnom insuficijencijom i sindromom zastoja fetalnog rasta (FGRS). Zbog toga se u bolesnika s fetoplacentalnom insuficijencijom i IGR u krvnom serumu enzimskim imunološkim testom utvrđuje aktivnost superoksid dismutaze, sadržaj placentnog faktora rasta, endoglina i melatonina. Za ove pokazatelje koeficijent predikcije P izračunava se pomoću formule: P \u003d (0,0001 * COD + 0,0255 * Mel + 0,1636 * CD105 + (- 0,0487 * PGF) -8,5389, gdje je COD superoksid dismutaza, pg / ml, Mel - melatonin, pg / ml, CD 105 - endoglin, pg / ml, PGF - faktor rasta posteljice, pg / ml. S vrijednosti P od 0,64 ili više, predviđa se visok rizik od razvoja kritičnog stanja fetusa u antenatalnom razdoblju, zahtijeva završetak trudnoće operativnim zahvatom carski rez na hitnoj osnovi u interesu fetusa. Metoda osigurava povećanje točnosti predviđanja kritičnog stanja fetusa antenatalno, što omogućuje pravodobno odabir odgovarajuće taktike za upravljanje pacijentom. 2 pr.

Izum se odnosi na medicinu, naime na otolaringologiju, i može se koristiti za diferencijalnu ekspresnu dijagnostiku akutnog virusnog i bakterijskog tonzilitisa u odraslih. Za to se uzima periferna krv i određuje relativni sadržaj subpopulacija neutrofilnih granulocita, istovremeno izražavajući CD16, CD11b na površinskoj membrani. Prisutnost subpopulacije CD16brightCD11bdimNG% od 80 do 99,9% s velikom gustoćom ekspresije CD16 i malom gustoćom ekspresije CD11b uzima se kao normalno. Ako se subpopulacija CD16brightCD11bbrightNG ili CD16dimCD11bbrightNG otkrije u količini od 40% ili više, akutna virusna infekcija ili akutna bakterijska infekcija... Korištenje ove metode omogućuje vam osiguravanje točnosti diferencijalna dijagnoza akutni virusni i bakterijski tonzilitis u odraslih. 3 bivša, 1 tablica

Skupina izuma odnosi se na medicinu, naime na laboratorijsku dijagnostiku, a može se koristiti za istodobno otkrivanje predstavnika uvjetnih taksonomskih skupina mikroorganizama patogenih za ljude i životinje. Karakterizira ga upotreba najmanje pet imunokromatografskih trakastih testova smještenih u jednom tijelu. Istodobno, u prvom i drugom kanalu tijela uređaja nalaze se trakasti testovi za otkrivanje toksina, u trećem kanalu - trakasti test za otkrivanje vegetativnih oblika bakterija, u četvrtom - za spore oblike bakterija, a u petom kanalu - trakasti test za identificiranje medijuma za uzgoj virusa i rikecije. Ispitivanje se provodi stavljanjem tijela testova imunokromatografskih traka u toplinski izolirajuću ceflensku vrećicu, koja se sastoji od dva sloja ceflena, a između njih postoji toplinska izolacijska brtva od poroznog toplinskog izolacijskog materijala, a tijelo imunokromatografskih trakastih testova unutar vrećice zagrijava se stalnim izvorom topline, a otvor vrećice zatvara se mehaničkom stezaljkom i zatvara se ovaj trenutak smatrajte početkom ispitivanja. Predložen je i uređaj za imunokromatografsku analizu. Učinak: skupina izuma omogućuje povećanje produktivnosti imunokromatografske analize, proširenje temperaturnog raspona imunokromatografske analize s minus 20 na plus 50 ° C, smanjenje vremena dobivanja rezultata na 10 minuta u odnosu na analizu na sobnoj temperaturi (20 min), pod uvjetom da se postigne ista osjetljivost, kako bi se povećala osjetljivost analize u usporedbi s analizom provedenom na sobnoj temperaturi. 2 n. i 7 p.p. f-kristali, 5 rosa, 4 tbl., 8 pr.

Izum se odnosi na medicinu, naime na laboratorijsku dijagnostiku, i može se koristiti za dijagnosticiranje paroksizmalne noćne hemoglobinurije. Da biste to učinili, uzorak krvi koji se proučava obojite monoklonskim antitijelima CD235a CD59CD71. Prisutnost klona PNH među eritrocitima i retikulocitima procjenjuje se odsutnošću zaštitnog proteina CD59 na membrani retikulocita izoliranim vratima CD235a - markerom pan-eritrocita i CD71 - receptorima za transferin. Da bi se procijenio PNH klon među retikulocitima, u CD71 + vratima se prikupi najmanje 20 000 događaja, ovisno o CD71 + vratima, ucrtava se FSC vs SSC graf, na kojem se retikulociti izoliraju pomoću dodatnih CD71str vrata, čime se populacija retikulocita pročišćava od krhotina i dubleta metodom sekvencijalnog getiranja. U prisutnosti 100 CD59 pozitivnih retikulocita, ocjenjuje se odsutnost klona PNH i dijagnosticira odsutnost paroksizmalne noćne hemoglobinurije. Ako se otkrije pacijent s kliničkim simptomima negativnih CD59 retikulocita i vrijednost dobivenih pokazatelja je veća od 1, donosi se dijagnostički zaključak o prisutnosti PNH klona i preporučuje se dodatna studija prema međunarodnom standardiziranom protokolu za potvrdu dijagnoze paroksizmalne noćne hemoglobinurije. Prilikom otkrivanja negativnog za CD59 retikulocite i vrijednosti dobivenih pokazatelja 0,1-1, procjenjuje se prisutnost manjeg PNH klona i preporučuje se ponovno utvrđivanje PNH klona nakon 6 mjeseci zbog povećanja njegove vrijednosti i razvoja paroksizmalne noćne hemoglobinurije, a nakon potvrde takve veličine klona dijagnosticirati subklinički oblik paroksizmalne noćne hemoglobinurije bez kliničkih znakova. Korištenje višeparametarskog spajanja CD71 + stanica omogućuje izlučivanje krhotina, dubleta i nespecifično vezanih monoklonskih antitijela. 1 bolestan.

Paroksizmalna noćna hemoglobinurija (PNH) stečena je bolest koja se očituje stalnom hemolitičkom anemijom, paroksizmalnom ili trajnom hemoglobinurijom i intravaskularnom hemolizom. Rijetkost ove vrste hemolitičke anemije karakterizira činjenica da PNH pogađa 1 osobu od pola milijuna, uglavnom mladih ljudi.

Uzroci bolesti trenutno zasigurno nisu poznati. Pretpostavlja se da se javlja zbog pojave abnormalnog klona crvenih krvnih stanica, sklonih intravaskularnoj hemolizi. Zauzvrat, inferiornost eritrocita posljedica je strukturnih i biokemijskih oštećenja njihove membrane. Poznato je da se peroksidacija lipida aktivira u neispravnoj membrani, što pridonosi ranoj lizi eritrocita, osim toga, abnormalni klonovi granulocita i trombocita sudjeluju u patološkom procesu. Glavna uloga u nastanku trombotičkih komplikacija PNH pripada intravaskularnom uništavanju eritrocita i pokretanju koagulacije krvi čimbenicima oslobođenim u ovom slučaju. PNH u pravilu započinje postupno i kronično napreduje povremenim krizama. Krize provociraju virusne infekcije, kirurške intervencije, psiho-emocionalni stres, menstruacija, upotreba broja lijekovi i prehrambenih proizvoda.

Simptomi paroksizmalne noćne hemoglobinurije

Simptomi PNH tijekom krize:

• paroksizmalna bol u trbušne;
• bolovi u lumbalnoj regiji;
• ikterus koža i bjeloočnice; hipertermija; pastozno lice;
• crna boja urina, uglavnom noću;
• naglo smanjenje krvnog tlaka;
• prolazno povećanje slezene;
• prestanak protoka urina.

U nekim je slučajevima hemolitička kriza fatalna.

PNH simptomi izvan krize:

• opća slabost;
• blijeda, s ikteričnim nijansom, boja kože;
• anemija;
• tendencija stvaranja tromba; hematurija; povećao krvni tlak; povećana jetra; dispneja; lupanje srca; česte zarazne bolesti.

Dijagnostika

• Krvni test: anemija (normokromna, kasnije, hipokromna), umjerena leukocito- i trombocitopenija, razina serumskog željeza je značajno smanjena.
• Analiza urina: njegovo bojenje u crno, hemoglobinurija, hemosiderinurija, proteinurija. Gregersenov test benzidina u mokraći je pozitivan.
• Hamov specifični test je pozitivan.
• Hartmannov specifični test je pozitivan.
• Interpunkcija koštana srž: hiperplazija crvene krvotvorne klice, ali u težim slučajevima može se primijetiti i hipoplazija koštane srži, povećanje količine masnog tkiva u koštanoj srži.

Liječenje paroksizmalne noćne hemoglobinurije

Liječenje PNH-om je simptomatično i sastoji se uglavnom od zamjenskih transfuzija krvi, čiji volumen i učestalost ovise o "odgovoru" na ove mjere. U liječenju PNH, metandrostenolon se koristi u dozi od 30-50 mg / dan tijekom najmanje 2-3 mjeseca. Borba protiv hipoplazije koštane srži provodi se intravenskom primjenom antitimocitnog imunoglobulina u dozi od 150 mg / dan, tijekom 4 do 10 dana. Preporuča se uzimanje pripravaka željeza per os u malim dozama. Ponekad dobar efekt daju velike doze kortikosteroida. Hipoplazija koštane srži s razvojem trombotičnih komplikacija indikacija je za njezinu transplantaciju. Opisani su izolirani slučajevi oporavka od PNH; u nekim slučajevima trajanje povoljnog tijeka bolesti je nekoliko desetljeća.

Esencijalni lijekovi

Postoje kontraindikacije. Potrebna je specijalistička konzultacija.

RCHD (Republikanski centar za razvoj zdravstvene zaštite Ministarstva zdravstva Republike Kazahstan)
Verzija: Klinički protokoli MH RK - 2015

Paroksizmalna noćna hemoglobinurija [markaafava-mikeli] (D59.5)

Onkohematologija

opće informacije

Kratki opis

Preporučeno
Stručno vijeće
RSE na REM-u "Republikanski centar
razvoj zdravlja "
Ministarstvo zdravlja
i društveni razvoj
Republika Kazahstan
od 9. srpnja 2015
Protokol br. 6

Klasifikacija

Klinička klasifikacija:

Postoje 3 glavna oblika APG-a.
1. Klasični oblikkarakterizirani kliničkim i laboratorijskim znakovima intravaskularne hemolize bez znakova drugih bolesti povezanih s zatajenjem koštane srži (aplastična anemija (AA), mijelodisplastični sindrom (MDS), idiopatska mijelofibroza).
2. PNH dijagnosticiran u bolesnika s AA (AA / PNG),MDS (MDS / APG)i izuzetno rijetko s mijelofibrozom (idiopatska mijelofibroza / PNH),kada kod ovih bolesti postoje klinički i / ili laboratorijski znakovi intravaskularne hemolize, a u perifernoj krvi određuje se klon stanica s PNH fenotipom.
3. Subklinički oblikbolesti ( AA / cPNG, MDS / cPNG, idiopatska mijelofibroza / cPNG), dijagnosticiran u bolesnika bez kliničkih i laboratorijskih znakova hemolize, ali u prisutnosti manjeg klona stanica s PNH fenotipom (u pravilu,<1 %). Следует отметить, что субклиническое течение ПНГ может отмечаться и при большем размере клона.

Izolacija subkliničkog oblika PNH nema neovisno kliničko značenje, ali potrebno je osigurati praćenje takvih bolesnika u vezi s vjerojatnošću povećanja veličine klona i progresije hemolize, što može dominirati među kliničkim manifestacijama i zahtijevati odgovarajuću terapiju.
Uzimajući u obzir da supklinički oblik PNH kod AA i / ili MDS-a nema neovisno kliničko značenje.

Klasični oblik APG-a.
U bolesnika s klasičnim PNH u pravilu dolazi do izražene intravaskularne hemolize s porastom razine laktat dehidrogenaze (LDH) u krvnom serumu, retikulocitozom i smanjenjem razine haptoglobina. S ovom varijantom PNH nema definitivnih morfoloških znakova druge patologije koštane srži (AA, MDS, mijelofibroza) i nema abnormalnosti kariotipa

PNH u pozadini sindroma insuficijencije koštane srži (AA / PNH, MDS / PNH).
Pacijentima s AA / PNH i MDS / PNH dijagnosticirani su klinički i laboratorijski znakovi intravaskularne hemolize. U različitim fazama razvoja bolesti mogu prevladati simptomi zatajenja koštane srži ili intravaskularne hemolize, a u nekim slučajevima postoji i njihova kombinacija. Unatoč činjenici da se u bolesnika s malim klonom PNH bolest obično odvija s minimalnim simptomima i bilježe se samo laboratorijski znakovi intravaskularne hemolize, nadzor je potreban (2 puta godišnje). To je zbog činjenice da je s vremenom moguće širenje klona s razvojem ozbiljne hemolize i velikim rizikom od trombotičkih komplikacija.

Subklinički oblik APG-a (AA / sPNG, MDS / sPNG).
Pacijenti sa subkliničkom PNH nemaju kliničkih ili laboratorijskih dokaza hemolize. Male populacije stanica s nedostatkom GPIAP-a mogu se otkriti samo visoko osjetljivom protočnom citometrijom. Subklinički PNH može se dijagnosticirati u pozadini bolesti koje karakterizira disfunkcija koštane srži, uglavnom AA i MDS. Vrlo je važno pažljivo pratiti te bolesnike kako bi se otkrili znakovi hemolize i ekspanzije klonova, jer 15-17% bolesnika s AA / subkliničkim PNH ima s vremenom se razvija hemolitički oblik AA / PNH.

Dijagnostika

Popis osnovnih i dodatnih dijagnostičkih mjera:
Osnovni (obvezni) dijagnostički pregledi koji se provode na ambulantnoj razini:
Opći test krvi (brojanje retikulocita u razmazu);
· Imunofenotipizacija periferne krvi za određivanje postotka PNH u eritrocitima tipa I, II i III protočnom citometrijom;
· Biokemijski test krvi (ukupni bilirubin, izravni bilirubin, LDH);
· Test Coombs-a;
· Mijelogram.

Dodatni dijagnostički pregledi provedeni na ambulantnoj razini:



· Određivanje koncentracije folne kiseline i vitamina B12;
· Koagulogram;
· Standardni citogenetski pregled koštane srži;
· Opća analiza urina
ELISA za markere virusnog hepatitisa;
· ELISA za HIV markere;
ELISA za markere virusa herpesa;
· HLA - tipkanje;
EKG;
· Ultrazvuk trbušnih organa (jetra, slezena, gušterača, žučni mjehur, limfni čvorovi, bubrezi, kod žena - mala zdjelica;

Minimalni popis pregleda koji se moraju obaviti kada se govori o planiranoj hospitalizaciji:
Opći test krvi (brojanje leukoformule, trombocita i retikulocita u razmazu);
Mijelogram;
Krvna grupa i rezus faktor
· Biokemijski test krvi (ukupni protein, albumin, ukupni bilirubin, izravni bilirubin, kreatinin, urea, ALaT, ASaT, GGTP, glukoza, LDH, C-reaktivni protein, alkalna fosfataza);
· Test Coombs-a;
· Ultrazvuk trbušne šupljine i slezene;
· Ultrazvuk zdjeličnih organa - za žene.

Osnovni (obvezni) dijagnostički pregledi koji se provode na stacionarnoj razini:

Opći test krvi (brojanje leukoformule, trombocita i retikulocita u razmazu);
- imunofenotipizacija periferne krvi za određivanje postotka PNH u eritrocitima tipa I, II i III protočnom citometrijom;
- biokemijski test krvi (ukupni bilirubin, izravni bilirubin, LDH);
- Coombsov test
- mijelogram.
- standardni citogenetski pregled koštane srži;
- ELISA za markere virusnog hepatitisa;
- ELISA za HIV markere;
- ELISA za markere virusa herpesa;
· Rentgen prsnog koša.
Dodatni dijagnostički pregledi provedeni na stacionarnoj razini:
· Određivanje razine haptoglobina.
· Krvna grupa i Rh faktor;
· Biokemijski test krvi (ukupni protein, albumin, ukupni bilirubin, izravni bilirubin, kreatinin, urea, ALaT, ASaT, glukoza, LDH, GGTP, C-reaktivni protein, alkalna fosfataza);
· Metabolizam željeza (određivanje razine serumskog željeza, ukupne sposobnosti vezivanja željeza u serumu i razine feritina);
· Određivanje koncentracije folne kiseline i vitamina B12;
· Koagulogram;
· HLA - tipkanje;
· Opća analiza urina;
· Određivanje razine hemosiderina u mokraći;
· Test Reberg-Tareev (određivanje brzine glomerularne filtracije);
EKG;
· Ultrazvuk trbušnih organa (jetra, slezena, gušterača, žučni mjehur, limfni čvorovi, bubrezi, kod žena - mala zdjelica;
· RTG prsnog koša;
· USDG arterija i vena;
· Ehokardiografija;
EGDS (širenje vena jednjaka);
· Svakodnevno praćenje krvnog tlaka;
· 24-satno praćenje EKG-a.

Dijagnostičke mjere provedene u fazi hitne medicinske pomoći:
· Prikupljanje pritužbi i anamneza bolesti;
· Sistematski pregled.

Dijagnostički kriteriji za dijagnozu:

Prigovori i anamneza:
- slabost;
- brza zamornost;


- pojačano krvarenje.

Anamneza: trebali biste obratiti pažnju na:
- dugotrajna slabost;
- brzi umor;
- česte zarazne bolesti;
- akutni napadi boli u lumbalnoj regiji;
- potamnjivanje mokraće, uglavnom noću i ujutro;
- Budd-Chiari sindrom (tromboza jetrenih vena);
- tromboza različitih lokalizacija;
- pojačano krvarenje;
- pojava hemoragičnih osipa na koži i sluznici;
- dispanzersko računovodstvo za AA ili MDS.

Sistematski pregled[ 8 ]:
- kombinacija bljedoće i žutosti kože;
- hemoragični osip - petehije, ekhimoza različitih lokalizacija;
otežano disanje;
- tahikardija;
- povećana jetra;
- povećana slezena.

Laboratorijska istraživanja:
Ako se sumnja na PNH, protočna citometrija daje točnu dijagnozu. Protočna citometrija najosjetljivija je i informativna metoda.
· Opća analiza krvi:Broj retikulocita obično je povećan, a prema brisima periferne krvi, eritrociti se morfološki ne razlikuju od norme. Kao rezultat hemolize, u krvi su često prisutni normoblasti, zabilježena je polikromatofilija. Kao rezultat značajnih gubitaka željeza u mokraći u bolesnika s PNH, postoji velika vjerojatnost nastanka nedostatka željeza, a zatim eritrociti dobivaju izgled karakterističan za IDA - hipokromni sa tendencijom na mikrocitozu. Broj leukocita i trombocita često se smanjuje. Također se može primijetiti pancitopenija različite težine. Međutim, za razliku od aplastične anemije, retikulocitoza se obično javlja zajedno s citopenijom.
· Kemija krvi:U krvnom serumu povećana je količina bilirubina, slobodnog hemoglobina i methemoglobina. Postoje znakovi intravaskularne hemolize, odnosno smanjenja ili odsutnosti haptoglobina, povećanja LDH, povećane razine slobodnog hemoglobina i željeza u mokraći. Niske razine haptoglobina dosljedno se primjećuju kod intravaskularne hemolize, ali se javljaju i u slučajevima ekstravaskularne hemolize, posebno kronične hemolize. Budući da je haptoglobin također reagens u akutnoj fazi, njegovo naglo smanjenje ili odsustvo je najinformativnije.
· U mokraći:mogu se utvrditi hematurija i proteinurija. Hemosiderinurija i otkrivanje detritusa u krvi u mokraći stalni su znakovi dijagnostičke vrijednosti.
· Morfološka istraživanja:Hiperplazija eritroida otkriva se u koštanoj srži. Često se utvrđuje hipoplazija koštane srži, smanjeni sadržaj siderocita i sideroblasta.
· Imunofenotipizacija: Rani i pouzdani znak fenotipa PNH je ekspresija GPI povezanih proteina: ekspresija CD14 i CD48 određuje se na monocitima, CD16 i CD66b - na granulocitima, CD48 i CD52 - na limfocitima, CD55 i CD59 - na eritrocitima, CD55, CD58.

Instrumentalna istraživanja:
· Ultrazvuk trbušnih organa: povećanje veličine jetre, slezene.
· Doppler ultrazvuk arterija i vena:prisutnost tromboze arterija i vena
· EKG: kršenje provođenja impulsa u srčanom mišiću.
· EchoCG:znakovi zatajenja srca (EF<60%), снижение сократимости, диастолическая дисфункция, легочная гипертензия, пороки и регургитации клапанов.
· CT / MRI cijelog tijela:otkrivanje tromboze (cerebralne, portalne itd.)
· CT skeniranje torakalnog segmenta:infiltrativne promjene u plućnom tkivu, znakovi plućne hipertenzije.
· FGDS: proširene vene jednjaka.
· Spirografija: ispitivanje plućne funkcije.

Indikacije za savjetovanje uskih stručnjaka:
· Liječnik za endovaskularnu dijagnostiku i liječenje - postavljanje središnjeg venskog katetera s perifernog pristupa (PICC);
· Hepatolog - za dijagnozu i liječenje virusnog hepatitisa;
· Ginekolog - trudnoća, metroragija, menoragija, savjetovanje pri propisivanju kombiniranih oralnih kontraceptiva;
Dermatovenerolog - sindrom kože
· Stručnjak za zarazne bolesti - sumnja na virusne infekcije;
· Kardiolog - nekontrolirana hipertenzija, kronično zatajenje srca, srčane aritmije i poremećaji provođenja;
· Neurološka akutna cerebrovaskularna nesreća, meningitis, encefalitis, neuroleukemija;
· Neurokirurg - akutni poremećaj cerebralne cirkulacije, sindrom dislokacije;
· Nefrolog (eferentolog) - zatajenje bubrega;
· Onkolog - sumnja na solidne tumore;
Otorinolaringolog - za dijagnozu i liječenje upalnih bolesti paranazalnih sinusa i srednjeg uha;
Oftalmolog - oštećenje vida, upalne bolesti oka i dodataka;
· Proktolog - analna pukotina, paraproktitis;
• psihijatar - psihoza;
· Psiholog - depresija, anoreksija itd .;
· Oživljavač - liječenje teške sepse, septičnog šoka, sindroma akutne plućne ozljede s diferencijacijskim sindromom i terminalnim stanjima, ugradnja središnjih venskih katetera.
· Reumatolog - Sweetov sindrom;
· Torakalni kirurg - eksudativni pleuritis, pneumotoraks, plućna zigomikoza;
· Transfuziolog - za odabir transfuzijskih medija s pozitivnim neizravnim testom antiglobulina, neučinkovitost transfuzija, akutni masivni gubitak krvi;
Urolog - zarazne i upalne bolesti mokraćnog sustava;
· Ftizijar - sumnja na tuberkulozu;
· Kirurg - kirurške komplikacije (zarazne, hemoragične);
· Maksilofacijalni kirurg - zarazne i upalne bolesti zubno-čeljusnog sustava.

Diferencijalna dijagnoza

Diferencijalna dijagnoza.
Diferencijalna dijagnoza provodi se s drugim vrstama hemolitičkih anemija, a s citopeničnim PNH - s aplastičnom anemijom.

Anemija nedostatka B-12.Često postoji potreba za diferencijalnom dijagnozom PNH, koja se javlja s pancitopenijom i hemolizom, s anemijom nedostatka B12 s hemolitičkim sindromom. Kod obje ove bolesti hemoliza je prilično izražena. Razlike između ovih bolesti prikazane su u tablici:

Stol. Diferencijalne dijagnostičke razlike između anemije s nedostatkom B12 i PNH.

Liječenje

Ciljevi liječenja:
Postizanje i održavanje remisije (vidi točku 15. - Pokazatelji učinkovitosti liječenja).

Taktika liječenja:
Liječenje bez lijekova:
Način II:opća zaštita.
Dijeta:Neutropeničnim bolesnicima se ne savjetuje da slijede određenu prehranu ( razina dokaza B).

Liječenje.
Na slici je prikazan opći algoritam za liječenje bolesnika s PNH, ovisno o obliku bolesti i težini hemolize.

Algoritam za liječenje bolesnika s PNH.


Terapija eklizumababom.
Ekulizumab je humanizirano monoklonsko antitijelo koje se veže na C5 komponentu komplementa. To sprječava cijepanje C5 u C5a i C5b, čime se inhibira stvaranje proupalnih citokina (putem C5a) i MAC (putem C5b).
Trenutno postoji jedna multicentrična, randomizirana, dvostruko slijepa, s placebom kontrolirana studija TRIUMPH koja je procjenjivala učinkovitost ekulizumaba u stabilizaciji razine hemoglobina i smanjenju ovisnosti o transfuziji u 87 bolesnika s PNH o transfuziji tijekom 6 mjeseci terapije.
Studija je obuhvatila pacijente starije od 18 godina koji su prošli najmanje 4 transfuzije medija koji sadrže eritrocite u posljednjih godinu dana, s klonom PNH eritrocita tipa III od najmanje 10%, razinom trombocita od najmanje 100 tisuća / μL, povećanjem LDH od ³1,5 normalno. Svi su bolesnici prije početka terapije primili meningokokno cjepivo.
Glavni rezultat studije bila je stabilizacija razine hemoglobina u 49% bolesnika koji su primali ekulizumab (str<0,001) и снижение необходимости в трансфузиях в этой группе до нуля (в группе плацебо за 6 месяцев потребовалось от 6 до 16 трансфузий), а также улучшение качества жизни.
Rezultati ove studije poslužili su kao osnova za odobrenje FDA-e za upotrebu ekulizumaba u PNH-u ovisnom o transfuziji s hemolizom.
Istraživanje R. Hillmen i sur. i naknadne prospektivne studije imaju određena ograničenja koja otežavaju ekstrapolaciju njegovih rezultata na sve pacijente s PNH, koja su detaljno opisana u izvješću FDA i Cochrane recenziji Artura J Martí-Carvajala:
· Djelotvornost je ispitivana samo u bolesnika starijih od 18 godina;
· Podaci o starijim pacijentima također su ograničeni (samo 15 pacijenata u studiji imalo je više od 65 godina);
· Studija je obuhvatila samo bolesnike s hemolizom ovisne o transfuziji;
· Mali broj bolesnika s epizodama tromboze, velika učestalost propisivanja antikoagulantne profilakse ne dopušta procjenu učinka ekulizumaba na rizik od trombotičkih komplikacija i preporuka da se napusti uporaba antikoagulansa u bolesnika koji primaju ekulizumab. Relativno smanjenje učestalosti trombotičnih epizoda u pozadini antikoagulantne profilakse i terapije ekulizumabom iznosi 81%;
· Korišteni upitnik za kvalitetu života nije validiran za pacijente s PNH, a poboljšanje kvalitete života moglo bi biti povezano samo s povećanjem razine hemoglobina;
· Kratko razdoblje promatranja;
· Istraživanje je sponzorirao proizvođač lijekova;
· Nema podataka o učinku ekulizumaba u odnosu na placebo na ukupno preživljenje, rizik od transformacije u AML i MDS. Povećanje ukupnog preživljavanja prikazano je u samo jednoj povijesno kontroliranoj studiji (razdoblje 1997.-2004.). U 2013. godini objavljeni su podaci iz tri prospektivne studije na 195 bolesnika s PNH i hemolizom koji su pokazali 97,6% stope preživljavanja nakon 36 mjeseci, ali nije bilo usporedbe s placebo skupinom.
· Ograničeni podaci o primjeni ekulizumaba u trudnica. Trudnoća povećava učestalost ozbiljnih po život opasnih komplikacija PNH. Postoji velika vjerojatnost da ekulizumab prijeđe krvno-placentnu barijeru i majčino mlijeko. Zbog rijetkosti bolesti, trenutno ne postoje kontrolirane studije učinkovitosti ekulizumaba u trudnica. Opisana su dva slučaja propisivanja ekulizumaba trudnicama od 4 i 5 tjedana trudnoće, nakon čega slijedi nekomplicirani tijek trudnoće i rođenje zdrave djece
· Čak i uz dugotrajno liječenje koje traje oko 30 mjeseci, oko 18% bolesnika i dalje ovisi o transfuziji. Moguće objašnjenje ovog fenomena je sudjelovanje fragmenta komplementa u procesima intravaskularne hemolize C3, što ekulizumab ne inhibira.

Ekulizumab se može preporučiti za uključivanje u program liječenja za sljedeće kategorije bolesnika s klasičnim PNH starijim od 18 godina:
Ovisnost o transfuziji zbog kronične hemolize ( razina dokaza A);
Prisutnost trombotičnih komplikacija ( razina dokazaD);
Trudnoća u bolesnica s PNH ( razina dokazaD).

Pri određivanju indikacija za terapiju ekulizumabom ne treba uzimati u obzir samo razinu LDH.

Način primjene i doziranje ekulizumaba
Lijek se primjenjuje intravenozno, kap po kap, unutar 25-45 minuta - za odrasle.
Tijek liječenja uključuje početni ciklus od 4 tjedna nakon kojeg slijedi ciklus održavanja. Početni ciklus je 600 mg lijeka jednom tjedno tijekom 4 tjedna. Terapija održavanja - 900 mg 5. tjedna, nakon čega slijedi uvođenje 900 mg lijeka svakih (14 ± 2) dana.

"Probojna" hemoliza.
Standardni režim terapije ekulizumabom dovoljan je za potpunu i stabilnu blokadu hemolize posredovane komplementom. U nekih bolesnika zbog
karakteristike metabolizma lijeka ili infekcije mogu razviti "probojnu" hemolizu. U ovoj se situaciji znakovi hemolize pojavljuju za 2-3 dana.
prije sljedeće primjene ekulizumaba. Pacijenti mogu razviti hemoglobinuriju, vratiti izvorne simptome (otežano disanje, slabost, grč glatkih mišića itd.), Potrebu za transfuzijom, povećanje razine LDH, retikulocita i smanjenje razine haptoglobina. Liječenje "probojne" hemolize uključuje smanjenje intervala između injekcija ekulizumaba na 12 dana ili povećanje doze na 1200 mg za 1-2 injekcije.

Prevencija i liječenje meningokokne infekcije.
Tijekom liječenja ekulizumabom potrebno je kontrolirati pojavu simptoma infekcije i bakterijskih infekcija, pravodobno propisati antibiotike. Pri dijagnosticiranju meningokokne infekcije otkazuje se sljedeća primjena lijeka.
Mehanizam djelovanja lijeka ekulizumab sugerira povećani rizik od meningokokne infekcije ( Neisseria meningitidis) u pozadini njegove uporabe (razina dokaza B).
Svi pacijenti moraju biti cijepljeni protiv meningokoka 2 tjedna prije početka primjene lijeka, kao i revakcinacija između 2,5-3 godine terapije. Najpoželjnije je četverovalentno konjugirano cjepivo protiv serotipova A, C, Y i W135. Ako necijepljeni pacijent treba hitno liječenje ekulizumabom, moguće je započeti terapiju odgovarajućom antibiotskom profilaksom, koju treba nastaviti 2 tjedna nakon cijepljenja protiv meningokokne infekcije.

Simptomatska terapija.
U liječenju ekulizumaba, simptomatska terapija uključuje imenovanje folne kiseline (5 mg / dan), vitamina B12 (s nedostatkom), pripravaka željeza (s nedostatkom), antikoagulansa (varfarin, heparin male molekularne težine) za trombotičke komplikacije, transfuziju krvnih proizvoda ovisno o kliničkim simptomima, hidratacija s razvojem hemolitičke krize. Pripravke željeza treba propisivati \u200b\u200bs oprezom zbog mogućnosti povećane hemolize.

Antikoagulantna terapija.
Nakon trombotskog događaja može se preporučiti dugotrajna (doživotna) terapija antikoagulansima (derivati \u200b\u200bkumarina ili heparini). Terapija Budd-Chiarijevog sindroma zahtijeva da pacijent bude na specijaliziranom kirurškom odjelu za lokalnu i sistemsku trombolizu. Antikoagulantna terapija za primarnu prevenciju tromboze može biti indicirana u nekim slučajevima kada se PNH klon otkrije u ≥ 50% granulocita i u prisutnosti dodatnih rizika od trombotičkih komplikacija, osim u bolesnika s aplazijom koštane srži.

Podrška za transfuziju.
Indikacije za transfuziju komponenata krvi:

Suspenzija / masa eritrocita.
· U odnosu na suspenziju / masu eritrocita, neophodan je odabir prema krvnoj grupi i Rh faktoru;
· U odnosu na pacijente s višestrukom transfuzijom u povijesti, poželjno je odabrati za sljedeće antigene: Kell, Duffy, Kidd, MNS;
· Neposredno prije transfuzije suspenzije / mase eritrocita, potrebno je provesti test kompatibilnosti sa standardnim serumima;
Pragovi pokazatelja pri kojima se uzima u obzir potreba za transfuzijom suspenzije / mase eritrocita: Hb<80 г/мл, Ht <25%;
· Izračun maksimalnog volumena suspenzije / mase eritrocita određuje se prema sljedećoj formuli: Hb (g / dl) x4 x masa primatelja (kg).

Koncentrat trombocita.
· Koncentrat trombocita mora se odabrati prema krvnoj grupi i Rh faktoru;
Transfuzija koncentrata trombocita kako bi se spriječilo krvarenje provodi se na razini Tr<10 тыс кл/мкл;
Pacijentima s febrilnom vrućicom, krvarenjem sluznice, preporučuje se transfuzija koncentrata trombocita na Tr<20 тыс кл/мкл;
Pri planiranju invazivne intervencije za pacijenta, preporučuje se transfuzija koncentrata trombocita na Tr<50 тыс кл/мкл;
· Terapijska doza trombocita preporučena za odrasle: 3 x 10 11 stanica / l u volumenu od 200-300 ml.

Procjena učinkovitosti transfuzije:
· Zaustavljanje krvarenja;
Određivanje razine trombocita sljedeći dan - postojana razina Tr<20 тыс кл/мкл свидетельствует о рефрактерности к трансфузиям;
Ako su isključeni svi uzroci trombocitopenije, potrebno je testirati na prisutnost antitela protiv leukocita;
· Ako se otkriju antitijela, transfuzija trombocita mora se obaviti od davatelja kompatibilnog s HLA.

Svježe smrznuta plazma.
Budući da FFP sadrži komplement, njegova transfuzija može izazvati razvoj hemolize u bolesnika s PNH. Treba izbjegavati transfuziju FFP u PNH.

Medicinski tretman koji se pruža ambulantno:
- popis osnovnih lijekova s \u200b\u200bnaznakom oblika oslobađanja (koji imaju 100% vjerojatnost upotrebe):

Antineoplastični i imunosupresivni lijekovi
... ekulizumab * 300 mg, koncentrat za otopinu za infuziju, 10 mg / ml.

Filgrastim, otopina za injekciju 0,3 mg / ml, 1 ml;
· Ondansetron, otopina za injekciju 8 mg / 4 ml.

Antibakterijska sredstva
Azitromicin tableta / kapsula, 500 mg
Amoksicilin / klavulanska kiselina, filmom obložena tableta, 1000 mg;
Moksifloksacin tableta, 400 mg
Ofloksacin, tableta, 400 mg;
Ciprofloksacin tableta, 500 mg;
· Metronidazol, tableta, 250 mg, zubni gel 20 g;
Eritromicin 250 mg tableta.

Anidulafungin, liofilizirani prašak za otopinu za injekciju, 100 mg / bočica;



Klotrimazol, otopina za vanjsku primjenu 1% 15ml;

Flukonazol kapsula / tableta 150 mg.

Aciklovir, tableta, 400 mg, gel u epruveti 100000 ED 50 g;


Famciklovir tablete 500mg

Rješenja koja se koriste za ispravljanje kršenja ravnoteže vode, elektrolita i kiseline i baze

· Dekstroza, otopina za infuziju 5% 250ml;
· Otopina natrijevog klorida za infuziju 0,9% 500ml.

Heparin, otopina za injekciju 5000 IU / ml, 5 ml; (za ispiranje katetera)

Rivaroksaban tableta;
Kapsula / tableta traneksaminske kiseline 250 mg;

Ambroxol, otopina za oralnu primjenu i inhalaciju, 15 mg / 2 ml, 100 ml;

Atenolol 25 mg tableta



Drotaverin, tableta od 40 mg;


Levofloksacin, tableta, 500 mg

Lizinopril, tableta od 5 mg;
Metilprednizolon tableta, 16 mg;

Omeprazol, kapsula 20 mg;

Prednizon, tableta, 5 mg;
· Dioktatralni smektit, prašak za pripremu suspenzije za oralnu primjenu, 3,0 g;

Torasemid, tableta od 10 mg;
Fentanil, terapijski transdermalni sustav 75 mcg / h; (za liječenje kronične boli u bolesnika s karcinomom)

Stacionarno liječenje od droga:
- popis osnovnih lijekova s \u200b\u200bnaznakom oblika oslobađanja (koji imaju 100% vjerojatnost upotrebe):

Ekulizumab * 300 mg, koncentrat za otopinu za infuziju, 10 mg / ml.

- popis dodatnih lijekova s \u200b\u200bnaznakom oblika oslobađanja (manje od 100% vjerojatnosti primjene):

Lijekovi koji slabe toksični učinak lijekova protiv raka
... filgrastim, otopina za injekciju 0,3 mg / ml, 1 ml;
... ondansetron, otopina za injekciju 8 mg / 4 ml.

Antibakterijska sredstva
Azitromicin, tableta / kapsula, 500 mg, liofilizirani prah za pripremu otopine za intravensku infuziju, 500 mg;
Amikacin, prašak za injekcije, 500 mg / 2 ml ili prašak za pripremu otopine za injekciju, 0,5 g;
Amoksicilin / klavulanska kiselina, filmom obložena tableta, 1000 mg, prašak za pripremu otopine za intravensku i intramuskularnu primjenu 1000 mg + 500 mg;
Vankomicin u prahu / liofilizat za pripremu otopine za infuziju 1000 mg;
· Gentamicin, otopina za injekciju 80 mg / 2 ml 2 ml;
Imipinem, cilastatin u prahu za otopinu za infuziju, 500 mg / 500 mg;
· Natrijev kolistimetat *, liofilizat za pripremu otopine za infuziju 1 ml U / bočica;
· Metronidazol tableta, 250 mg, otopina za infuziju 0,5% 100 ml, zubni gel 20g;
Levofloksacin, otopina za infuziju 500 mg / 100 ml, tableta 500 mg;
Linezolid, otopina za infuziju 2 mg / ml;
Meropenem, liofilizat / prašak za otopinu za injekciju 1,0 g;
Moksifloksacin, tableta 400 mg, otopina za infuziju 400 mg / 250 ml
Ofloksacin, tableta 400 mg, otopina za infuziju 200 mg / 100 ml;
Piperacillin, tazobaktam u prahu za pripremu otopine za injekciju 4,5 g;
Tigeciklin *, liofilizirani prašak za pripremu otopine za injekciju 50 mg / bočica;
Tikarcilin / klavulanska kiselina, liofilizirani prah za pripremu otopine za infuziju 3000mg / 200mg;
Cefepime, prašak za otopinu za injekcije 500 mg, 1000 mg;
· Cefoperazon, sulfaktamski prah za pripremu otopine za injekciju 2 g;
Ciprofloksacin, otopina za infuziju 200 mg / 100 ml, 100 ml, 500 mg tableta;
Eritromicin 250 mg tableta;
Ertapenem liofilizat, za pripremu otopine za intravenske i intramuskularne injekcije od 1 g.

Protugljivični lijekovi
Amfotericin B *, liofilizirani prašak za otopinu za injekciju, 50 mg / bočica;
Anidulofungin, liofilizirani prašak za otopinu za injekciju, 100 mg / bočica;
Vorikonazol, prašak za otopinu za infuziju 200 mg / bočica;
Vorikonazol tableta, 50 mg;
Itrakonazol, oralna otopina 10 mg / ml 150,0;
Caspofungin, liofilizat za pripremu otopine za infuziju 50 mg;
· Klotrimazol, krema za vanjsku primjenu 1% 30g, otopina za vanjsku primjenu 1% 15ml;
Mikafungin, liofilizirani prašak za pripremu otopine za injekciju 50 mg, 100 mg;
Flukonazol, kapsula / tableta 150 mg, otopina za infuziju 200 mg / 100 ml, 100 ml.

Antivirusni lijekovi
Aciklovir, krema za vanjsku upotrebu, 5% - 5,0, tableta - 400 mg, prašak za otopinu za infuziju, 250 mg;
Valaciklovir tableta, 500 mg;
Valganciklovir tableta, 450 mg;
Ganciklovir *, liofilizat za pripremu otopine za infuziju 500mg;
Famciklovir, tablete, 500 mg br. 14.

Lijekovi koji se koriste za pneumocistozu
Sulfametoksazol / trimetoprim, koncentrat za otopinu za infuziju (80 mg + 16 mg) / ml, 5 ml;
Sulfametoksazol / trimetoprim, tableta od 480 mg.

Dodatni imunosupresivni lijekovi:
Deksametazon, otopina za injekciju 4 mg / ml 1 ml;
Metilprednizolon, tableta od 16 mg, injekcija od 250 mg;
Prednizolon, otopina za injekciju 30 mg / ml 1 ml, tableta 5 mg.

Rješenja koja se koriste za ispravljanje kršenja ravnoteže vode, elektrolita i kiseline i baze, parenteralne prehrane
· Albumin, otopina za infuziju 10%, 100 ml;
· Albumin, otopina za infuziju 20% 100 ml;
· Voda za injekcije, otopina za injekcije 5 ml;
Dekstroza, otopina za infuziju 5% - 250m, 5% - 500ml; 40% - 10 ml, 40% - 20 ml;
Kalijev klorid, otopina za intravensku primjenu 40 mg / ml, 10 ml;
· Kalcijev glukonat, otopina za injekciju 10%, 5 ml;
· Kalcijev klorid, otopina za injekciju 10% 5ml;
Magnezijev sulfat, otopina za injekciju 25% 5 ml;
Manitol, otopina za injekciju 15% -200,0;
Natrijev klorid, otopina za infuziju 0,9% 500ml;
· Natrijev klorid, otopina za infuziju 0,9% 250 ml;
· Natrijev klorid, kalijev klorid, otopina natrijevog acetata za infuziju u bočici 200 ml, 400 ml;
· Natrijev klorid, kalijev klorid, otopina natrijevog acetata za infuziju 200 ml, 400 ml;
Natrijev klorid, kalijev klorid, otopina natrijevog bikarbonata za infuziju 400 ml;
L-alanin, L-arginin, glicin, L-histidin, L-izoleucin, L-leucin, L-lizin hidroklorid, L-metionin, L-fenilalanin, L-prolin, L-serin, L-treonin, L- triptofan, L-tirozin, L-valin, natrijev acetat trihidrat, natrijev glicerofosfat pentihidrat, kalijev klorid, magnezijev klorid heksahidrat, glukoza, kalcijev klorid dihidrat, emulzija mješavine maslinovog i sojinog ulja d / inf.: trokomorni spremnici 2 l
Hidroksietil škrob (penta škrob), otopina za infuziju 6% 500 ml;
· Kompleks aminokiselina, emulzija za infuziju koja sadrži mješavinu maslinovog i sojinog ulja u omjeru 80:20, otopinu aminokiselina s elektrolitima, otopinu dekstroze, s ukupnom kalorijskom vrijednošću od 1800 kcal, posudu od tri odjeljka od 1 500 ml.

Lijekovi koji se koriste za intenzivnu terapiju (kardiotonični lijekovi za liječenje septičnog šoka, relaksanti mišića, vazopresori i lijekovi za anesteziju):
· Aminophylline, otopina za injekciju 2,4%, 5 ml;
Amiodaron, otopina za injekciju, 150 mg / 3 ml;
Atenolol 25 mg tableta
Atracurium besilat, otopina za injekciju, 25 mg / 2,5 ml;
Atropin, otopina za injekciju, 1 mg / ml;
Diazepam, otopina za intramuskularnu i intravensku primjenu, 5 mg / ml 2 ml;
Dobutamin *, otopina za injekciju 250 mg / 50,0 ml;
Dopamin, otopina / koncentrat za pripremu otopine za injekciju 4%, 5 ml;
• jednostavni inzulin;
· Ketamin, otopina za injekciju 500 mg / 10 ml;
· Morfij, otopina za injekciju 1% 1 ml;
Noradrenalin *, otopina za injekciju 20mg / ml 4,0;
Pipekuronij bromid, liofilizirani prašak za injekcije 4 mg;
· Propofol, emulzija za intravensku primjenu 10 mg / ml 20 ml, 10 mg / ml 50 ml;
Rokuronij bromid, otopina za intravensku primjenu 10 mg / ml, 5 ml;
· Tiopental natrij, prašak za pripremu otopine za intravensku primjenu, 500 mg;
Fenilefrin, otopina za injekciju 1% 1 ml;
Fenobarbital, tableta od 100 mg;
· Ljudski normalni imunoglobulin, otopina za infuziju;
Epinefrin, otopina za injekciju 0,18% 1 ml.

Lijekovi koji utječu na sustav zgrušavanja krvi
Aminokaproična kiselina, otopina 5% -100 ml;
· Antiinhibitorni kompleks zgrušavanja, liofilizirani prah za pripremu otopine za injekcije, 500 IU;
Heparin, otopina za injekciju 5000 IU / ml, 5 ml, gel u epruveti 100000 ED 50 g;
· Hemostatska spužva, veličina 7 * 5 * 1, 8 * 3;
Nadroparin, otopina za injekciju u napunjenim špricama, 2850 IU anti-Xa / 0,3 ml, 5700 IU anti-Xa / 0,6 ml;
Enoxaparin, otopina za injekcije u špricama 4000 anti-Xa IU / 0,4 ml, 8000 anti-Xa IU / 0,8 ml.

Ostali lijekovi
Bupivakain, otopina za injekciju 5 mg / ml, 4 ml;
· Lidokain, otopina za injekciju, 2%, 2 ml;
· Prokain, otopina za injekciju 0,5%, 10 ml;
· Normalna otopina humanog imunoglobulina za intravensku primjenu 50 mg / ml - 50 ml;
Omeprazol, kapsula 20 mg, liofilizirani prašak za pripremu otopine za injekciju 40 mg;
Famotidin, liofilizirani prašak za pripremu otopine za injekciju 20 mg;
Ambroxol, otopina za injekciju, 15 mg / 2 ml, otopina za oralnu primjenu i inhalaciju, 15 mg / 2 ml, 100 ml;
Amlodipin, tableta / kapsula 5 mg;
Acetilcistein, prašak za otopinu za oralnu primjenu, 3 g;
Dexametazon, kapi za oči 0,1% 8 ml;
Difenhidramin, otopina za injekciju 1% 1 ml;
· Drotaverin, otopina za injekciju 2%, 2 ml;
Captopril 50 mg tableta
· Ketoprofen, otopina za injekciju 100 mg / 2ml;
Laktuloza, sirup 667g / l, po 500 ml;
Kloramfenikol, sulfadimetoksin, metiluracil, trimekainska mast za vanjsku uporabu 40g;
Lizinopril, tableta od 5 mg;
Metiluracil, topikalna mast u epruveti od 10% 25g;
Nafazolin, kapi za nos 0,1% 10ml;
Nicergolin, liofilizat za pripremu otopine za injekcije 4 mg;
· Povidon-jod, otopina za vanjsku primjenu 1 l;
· Salbutamol, otopina za raspršivač 5mg / ml-20ml;
· Smektit dioktaedar, prašak za pripremu suspenzije za oralnu primjenu 3,0 g;
Spironolakton, kapsula 100 mg;
Tobramicin, kapi za oči 0,3% 5ml;
Torasemid, tableta od 10 mg;
· Tramadol, injekcijska otopina od 100 mg / 2ml;
Tramadol, oralna otopina (kapi) 100 mg / 1 ml 10 ml;
Fentanil, terapijski transdermalni sustav 75 mcg / h (za liječenje kronične boli u bolesnika s karcinomom);
Folna kiselina, tableta, 5 mg;
Furosemid, otopina za injekciju 1% 2 ml;
Kloramfenikol, sulfadimetoksin, metiluracil, trimekainska mast za vanjsku uporabu 40g;
Klorheksidin, otopina 0,05% 100ml;
Kloropiramin, otopina za injekciju 20 mg / ml 1 ml.

Medicinski tretman u fazi hitne hitne pomoći:nije provedeno.

Ostali tretmani:
Ostali ambulantni tretmani: ne primjenjuju se.

Ostale vrste na stacionarnoj razini:

Transplantacija koštane srži (razina dokaza B)
Indikacije za BMT u PNH slične su teškoj aplastičnoj anemiji.
Iako ekulizumab kontrolira intravaskularnu hemolizu i povezane komplikacije PNH, prvenstveno ovisnost o transfuzijama, alogena transplantacija koštane srži (BMT) ostaje jedina radikalna metoda za postizanje lijeka za ovu bolest. Međutim, BMT je povezan s visokom smrtnošću. Dakle, u retrospektivnoj studiji na 26 pacijenata s PNH iz Italije koji su primili BMT, stopa 10-godišnjeg preživljavanja iznosila je 42%, a vjerojatnost dvogodišnjeg preživljavanja u 48 pacijenata koji su primili BMT od HLA-identičnog brata i sestre, prema Međunarodnom registru transplantacije koštane srži. činili 56%. Bez obzira na indikacije za koje se provodi BMT, stopa komplikacija ostaje vrlo visoka. Učestalost reakcija kalemljenja protiv domaćina u bolesnika s PNH iznosi 42-54%, polovica bolesnika razvija veno-okluzivnu bolest jetre, ne ugrađivanje ili odbacivanje, a uz to postoji i rizik od širenja klona PNH. BMT i pridružene komplikacije negativno utječu na kvalitetu života pacijenata.

Ostale vrste liječenja koje se pružaju tijekom faze hitne pomoći: ne primjenjuju se.

Značajke upravljanja trudnicama.
Trudnoća s PNH povezana je s visokom razinom smrtnosti majki i djece (11,6%, odnosno 7,2%).
Trenutno je opisano samo nekoliko slučajeva terapije ekulizumabom tijekom trudnoće s povoljnim ishodom za majku i fetus. Nema teratogenih učinaka lijeka. Terapija ekulizumabom ne smije se prekidati tijekom trudnoće. Ako pacijentica prethodno nije primila ekulizumab, lijek se može propisati tijekom trudnoće. U tom slučaju, terapiju ekulizumabom treba nastaviti 3 mjeseca nakon poroda. U slučajevima "probojne" hemolize tijekom trudnoće, možda će biti potrebna prilagodba doze lijeka (na primjer, terapija održavanja 900 mg tjedno).

Kirurška intervencija:
Kirurška intervencija pruža se ambulantno:nije provedeno.

Stacionarna kirurgija:
S razvojem zaraznih komplikacija i opasnih po život krvarenja, pacijenti se podvrgavaju hitnim kirurškim intervencijama.

Daljnje upravljanje:
Tijekom terapije ekulizumabom preporučuje se provesti sljedeće laboratorijske testove: CBC s određivanjem retikulocita, LDH, kreatinina u krvi, natriuretički peptid mozga B (ako je moguće), D-dimer, željezo u serumu, feritin, izravni test na antiglobulin. Veličina klona PNH kontrolira se na temelju rezultata vrlo osjetljive protočne citometrije.
Pacijenti koji primaju ekulizumab imaju statistički značajno povećanje veličine klona PNH. U studiji TRIUMPH, PNH klon eritrocita tipa III povećao se s 28,1% na 56,9% tijekom 26 tjedana, dok se nije promijenio u placebo skupini. Ako se ekulizumab ukine, potrebno je pratiti veličinu PNH klona, \u200b\u200brazinu retikulocita, haptoglobina, LDH, bilirubina, D-dimera radi pravodobnog otkrivanja hemolize i prevencije potencijalnih komplikacija.

Pokazatelji učinkovitosti liječenja:
Do sada je razvijen sustav vrednovanja odgovora na terapiju APG-om. Pri procjeni učinka liječenja, uzmite u obzir:
· Kliničke manifestacije - slabost;
· Razina hemoglobina;
· Potreba za transfuzijom komponenata krvi;
· Epizode tromboze;
· Aktivnost hemolize (razina retikulocita, LDH, haptoglobin).

Pripravci (aktivni sastojci) koji se koriste u liječenju

Skupine lijekova prema ATC-u koji se koriste u liječenju

Hospitalizacija

Indikacije za hospitalizaciju:
Indikacije za hitnu hospitalizaciju:
· Novo identificirani APG;
· Trombotske komplikacije;
· Hemolitička kriza;
· Febrilna neutropenija.

Indikacije za planiranu hospitalizaciju:
· Ispitivanje, utvrđivanje taktike za daljnje liječenje;
· Alogena transplantacija koštane srži.

Prevencija

Preventivne akcije:ne.

Informacija

Izvori i literatura

1. Zapisnici sa sastanaka Stručnog vijeća RCHD MHSD RK, 2015
   1. Popis korištene literature: 1. Škotska mreža interkolegijskih smjernica (SIGN). ZNAK 50: priručnik za programere smjernica. Edinburgh: ZNAK; 2014. (publikacija SIGN br. 50). ... Dostupno s URL-a: http://www.sign.ac.uk 2. Kulagin A.D., Lisukov I.A., Ptushkin V.V., Shilova E.R., Tsvetaeva N.V., Mikhailova E. I. Nacionalne kliničke smjernice za dijagnozu i liječenje paroksizmalne noćne hemoglobinurije, Oncohematology 2/2014 str. 20-28 3. Parker C., Omine M., Richards S. et al. Dijagnoza i liječenje paroksizmalne noćne hemoglobinurije. Krv 2005; 106: 3699-709. 4. de Latour R. P., Mary J. Y., Salanoubat C. i sur. Paroksizmalna noćna hemoglobinurija: prirodna anamneza potkategorija bolesti. Krv 2008; 112: 3099-106. 5. Brodsky R. A. Kako liječim paroksizmalnu noćnu hemoglobinuriju. Krv 2009; 113: 6522-7. 6. Movalia M. K., Weitz I., Lim S. H., Illingworth A. Incidencija klonova PNH dijagnostičkim kodom koji koristi protočnu citometriju visoke osjetljivosti. Krv (Sažeci godišnjeg sastanka ASH) 2011 .; 118: 1033. 7. Wanachiwanawin W., Siripanyaphinyo U., Piyawattanasakul N., Kinoshita T. Kohortna studija o prirodi paroksizmalnih noćnih klonova hemoglobinurije i mutacija PIG-A u bolesnika s aplastičnom anemijom. Eur J. Haematol 2006; 76: 502-9. 8. Hematologija; Najnoviji priručnik. Uredio doktor medicinskih znanosti. Profesor K.M. Abdulkadirov. Moskva: Izdavačka kuća Eksmo; Sankt Peterburg: Izdavačka kuća SOVA, 2004 .; 294-299 (prikaz, stručni). 9. Borowitz M. J., Craig F. E., Digiuseppe J. A. i sur. Smjernice za dijagnozu i praćenje paroksizmalne noćne hemoglobinurije i srodnih poremećaja protočnom citometrijom. CytometryB Clin Cytom 2010; 78 (4): 211-30. 10. Schubert J., Alvarado M., Uciechowski P. i sur. Dijagnoza paroksizmalne noćne hemoglobinurije pomoću imunofenotipizacije stanica periferne krvi. Br J Haematol 1991; 79: 487–92 11. Hammons A. H. Dijagnoza bolesti unutarnjih organa, svezak 4, Dijagnoza bolesti krvnog sustava. Izdavačka kuća: M: Medicinska literatura 2001. str.67, str.100, str.163. 12. Gardner A, Mattiuzzi G, Faderl S, Borthakur G, Garcia-Manero G, Pierce S, Brandt M, Estey E. Randomizirana usporedba kuhane i nekuhane dijete u bolesnika koji su podvrgnuti indukcijskoj terapiji remisije zbog akutne mijeloične leukemije. J ClinOncol. 2008. 10. prosinca; 26 (35): 5684-8. 13. Carr SE, Halliday V. Istraživanje upotrebe neutropenične prehrane: istraživanje britanskih dijetetičara. J Hum Nutr dijeta. 2014. kolovoz 28.14 Boeckh M. Neutropenična prehrana - dobra praksa ili mit? Transplantacija biolne krvne srži. 2012. rujna; 18 (9): 1318-9. 15. Trifilio, S., Helenowski, I., Giel, M. i sur. Ispitivanje uloge neutropenične prehrane nakon transplantacije hematopoetskih matičnih stanica. Transplantacija biolne krvne srži. 2012; 18: 1387-1392. 16. DeMille, D., Deming, P., Lupinacci, P. i Jacobs, L.A. Učinak neutropenične prehrane u ambulantnim uvjetima: pilot studija. Forum OncolNurs. 2006; 33: 337-343 17. Hillmen P., Hall C., Marsh J. C. i sur. Učinak ekulizumaba na potrebe hemolize i transfuzije u bolesnika s paroksizmalnom noćnom hemoglobinurijom. N Engl J Med 2004; 350: 552-9. 18. Hillmen P., Young N. S., Schubert J. i sur. Inhibitor komplementa ekulizumab u paroksizmalnoj noćnoj hemoglobinuriji. N Engl J Med 2006; 355: 1233–43. 19. Brodsky R. A., Young N. S., Antonioli E. i sur. Multicentrična studija 3. faze inhibitora komplementa ekulizumaba za liječenje bolesnika s paroksizmalnom noćnom hemoglobinurijom. Krv 2008; 111 (4): 1840-7. 20. Kelly R. J., Hill A., Arnold L. M. i sur. Dugotrajno liječenje ekulizumabom kod paroksizmalne noćne hemoglobinurije: trajna učinkovitost i poboljšanje preživljavanja. Krv 2011; 117: 6786-92. 21. Hillmen P., Muus P., Roth A. i sur. Dugotrajna sigurnost i učinkovitost trajnog liječenja ekulizumabom u bolesnika s paroksizmalnom noćnom hemoglobinurijom. Br J Haemotol 2013; 162 (1): 62–73. 22. Dmytrijuk A, Robie-Suh K, Cohen MH, Rieves D, Weiss K, Pazdur R. Izvještaj FDA: ekulizumab (Soliris) za liječenje pacijenata s paroksizmalnom noćnom hemoglobinurijom Onkolog. 2008. rujan; 13 (9): 993-1000. 23. Martí-Carvajal AJ, Anand V, Cardona AF, Solà I. Ekulizumab za liječenje bolesnika s paroksizmalnom noćnom hemoglobinurijom. Cochrane baza podataka Syst Rev. 2014. 30. listopada; 10: CD010340. 24. Kelly R, Arnold L, Richards S, Hill A, Bomken C, Hanley J, Loughney A, Beauchamp J, Khursigara G, Rother RP, Chalmers E, Fyfe A, Fitzsimons E, Nakamura R, Gaya A, Risitano AM, Schubert J, Norfolk D, Simpson N, Hillmen P. Upravljanje trudnoćom u paroksizmalnoj noćnoj hemoglobinuriji na dugotrajnom ekulizumabu. British Journal of Hematology, 2010; 149: 446-450. 25. Risitano AM. Paroksizmalna noćna hemoglobinurija i sustav komplementa: nedavni uvidi i nove strategije antikomplementacije Adv Exp Med Biol. 2013; 735: 155-72. 26. Paroksizmalna noćna hemoglobinurija (PNH). Preporuke društva za dijagnozu i terapiju hematoloških i onkoloških bolesti, 2012. www.dgho-onkopedia.de 27. Hall C., Richards S., Hillmen P. Primarna profilaksa varfarinom sprječava trombozu u paroksizmalnoj noćnoj hemoglobinuriji (PNH). Krv 2003; 102: 3587-91. 28. Santarone S., Bacigalupo A., Risitano A. M. i sur. Transplantacija hematopoetskih matičnih stanica za paroksizmalnu noćnu hemoglobinuriju: dugoročni rezultati retrospektivne studije u ime Gruppo Italiano Trapianto Midollo Osseo (GITMO). Haematologica 2010; 95: 983-8. 29. Saso R., Marsh J., Cevreska L. i sur. Transplantacija koštane srži za paroksizmalnu noćnu hemoglobinuriju. Br J Haematol 1999; 104: 392-6. 30. de Latour R. P., Schrezenmeier H., Mary J-Y. i sur. Transplantacija matičnih stanica za paroksizmalnokturnu hemoglobinuriju: trajno zajedničko istraživanje grupe AAWP EBMT i Francuskog društva za hematologiju (EBMTabstract 316). Transplantacija koštane srži 2009; 43 (Suppl 1): 57-8. 31. Armitage J. O. Transplantacija koštane srži. N Engl J Med 1994; 330: 827-38. 32. Benavides Lopez E. Klonska ekspanzija PNH nakon transplantacije koštane srži: prikaz slučaja. Haematologica 2011; 96: 524. 33. Fraser C. J., Bhatia S., Ness K. i sur. Utjecaj kronične bolesti transplantata protiv domaćina na zdravstveni status preživjelih nakon transplantacije hematopoetskih stanica: izvještaj Studije preživjelih od transplantacije koštane srži.Blood 2006; 108: 2867-73. 34. Bieri S., Roosnek E., Helg C. i sur. Kvaliteta života i socijalna integracija nakon alogene hematopoetske SCT. Bone MarrowTransplant 2008; 42: 819-27.

Informacija

Popis programera protokola s kvalifikacijskim podacima:

1) Kemaykin Vadim Matveevich - kandidat medicinskih znanosti, JSC "Nacionalni znanstveni centar za onkologiju i transplantologiju", voditelj Odjela za onkohematologiju i transplantaciju koštane srži.
2) Klodzinsky Anton Anatolyevich - kandidat medicinskih znanosti, JSC "Nacionalni znanstveni centar za onkologiju i transplantologiju", hematolog Odjela za onkohematologiju i transplantaciju koštane srži.
3) Ramazanova Raigul Mukhambetovna - doktor medicinskih znanosti, profesor JSC Kazahstansko medicinsko sveučilište za trajno obrazovanje, voditelj tečaja hematologije.
4) Gabbasova Saule Telembaevna - RSE na REM "Kazahstanski istraživački institut za onkologiju i radiologiju", voditeljica odjela za hemoblastozu.
5) Karakulov Roman Karakulovich - doktor medicinskih znanosti, profesor, akademik Moskovskog zrakoplovnog instituta Republikanskog državnog poduzeća Kazahstanskog istraživačkog instituta za onkologiju i radiologiju, glavni istraživač Odjela za hemoblastozu.
6) Tabarov Adlet Berikbolovich - voditelj Odjela za upravljanje inovacijama Republikanskog državnog poduzeća na REM-u "Bolnica Medicinskog centra, Upravni odjel predsjednika Republike Kazahstan", klinički farmakolog, pedijatar.
7) Rapilbekova Gulmira Kurbanovna, doktorica medicinskih znanosti. JSC "Nacionalni istraživački centar za majčinstvo i djetinjstvo" - voditelj akušerskog odjela №1.

Nema izjave o sukobu interesa:odsutan.

Recenzenti:
1) Afanasjev Boris Vladimirovič - doktor medicinskih znanosti, direktor Znanstvenoistraživačkog instituta za dječju onkologiju, hematologiju i transplantologiju imena R.M. Gorbačeva, voditeljica Odjela za hematologiju, transfuziologiju i transplantologiju Državnog proračunskog općeobrazovnog zavoda za visoko stručno obrazovanje Prvog državnog medicinskog sveučilišta u Sankt Peterburgu imena I. I.P. Pavlova.
2) Rakhimbekova Gulnar Ayapbekkyzy - doktor medicinskih znanosti, profesor, JSC "Nacionalni znanstveni medicinski centar", voditelj odjela.
3) Pivovarova Irina Alekseevna - liječnik medicinske medicine, magistar poslovne administracije, glavni slobodni hematolog Ministarstva zdravlja i socijalnog razvoja Republike Kazahstan.

Navođenje uvjeta za reviziju protokola:revizija protokola nakon 3 godine i / ili kada se pojave nove metode dijagnoze i / ili liječenja s višom razinom dokaza.

Priložene datoteke

Pažnja!

• Samo-lijekovi mogu nanijeti nepopravljivu štetu vašem zdravlju.
• Podaci objavljeni na web mjestu MedElement i u mobilnim aplikacijama "MedElement", "Lekar Pro", "Dariger Pro", "Diseases: Therapist's Guide" ne mogu i ne smiju zamijeniti osobno savjetovanje s liječnikom. Obavezno kontaktirajte liječnika ako imate bilo kakvu bolest ili simptome koji vas muče.
• Izbor lijekova i njihove doze trebaju se dogovoriti sa stručnjakom. Samo liječnik može propisati potreban lijek i njegovu dozu uzimajući u obzir bolest i stanje pacijentovog tijela.
• Internetska stranica i mobilne aplikacije MedElement "MedElement", "Lekar Pro", "Dariger Pro", "Bolesti: vodič za terapeuta" isključivo su informativni i referentni izvori. Podaci objavljeni na ovom mjestu ne smiju se koristiti za neovlašteno mijenjanje liječničkog recepta.
• Urednici MedElementa nisu odgovorni za bilo kakvu štetu po zdravlje ili materijalnu štetu koja je posljedica korištenja ove stranice.

Paroksizmalna noćna hemoglobinurija ozbiljna je stečena patologija skupine hemolitičkih anemija. Bolest Markiafava-Mikeli ili bolest Strubing-Markiafava, drugi nazivi ove patologije, uzrokuju uništavanje crvenih krvnih stanica u krvi. Bolest je vrlo rijetka, za 500 tisuća ljudi može se susresti 1 osoba s ovom patologijom.

Da se ne biste brinuli o razvoju mogućih komplikacija i posljedica patologije, trebali biste znati koja je dijagnoza paroksizmalne noćne hemoglobinurije, simptoma i liječenja patologije.

Uzroci hemoglobinurije

Kao što je gore spomenuto, paroksizmalna noćna hemoglobinurija vrlo je rijetka bolest, štoviše, patologija se najčešće nalazi u ljudi u dobi od 20 do 40 godina. Slučajevi razvoja bolesti u starijoj dobi ili u djece također su poznati medicinskoj praksi, ali oni čine zanemariv postotak.

Smatra se da je paroksizmalna noćna hemoglobinurija (PNH) uzrokovana mutacijskom reakcijom gena matičnih stanica (PIG-A), koji je sastavni dio X kromosoma u koštanoj srži, kao odgovor na neodređene čimbenike utjecaja. Neki izvori tvrde da su uzroci mutacije gena nepoznati.

Drugi tvrde da se hemoglobinurija može razviti u pozadini zaraznih bolesti, upale pluća, traume, opijenosti, hipotermije i opeklina, pa čak i teškog fizičkog stresa.

No, jednoglasno mišljenje o etiologiji patologije još nije utvrđeno.

Otkrivena je jasna veza između razvoja dijagnoze paroksizmalne noćne hemoglobinurije kao simptoma popratnih patologija. Medicinska istraživanja pokazala su da se PNH razvija kao posljedica aplastične anemije i drugih patologija krvožilnog sustava u 30% slučajeva.

Poznati je argument da čak i jedna mutirana stanica može dovesti do razvoja teškog oblika patološkog stanja. Tijekom stvaranja crvenih krvnih stanica, koje se odvija u koštanoj srži, matične stanice se dijele, sazrijevaju i puštaju u krvotok. Jedan modificirani gen podijeljen je u par, a one u par itd. To jest, jedna se stanica sam replicira, postupno puneći krv oštećenim eritrocitima.

Bit oštećenja crvenih krvnih stanica je nepotpuna ili nedostajuća proteinska membrana koja služi za zaštitu stanica od imunološkog sustava. Pri najmanjim oštećenjima stanice, tjelesni imunitet je uništava, uslijed čega se razvija dijagnoza poput hemolize - intravaskularno uništavanje eritrocita, koje karakterizira puštanje čistog hemoglobina u krv.

Isti se proces događa kod kronične hemolitičke anemije, stoga je paroksizmalna noćna hemoglobinurija njezin analogni, ili, kako to praktičari često kažu, akutni stečeni oblik. Glavna i jedina razlika između ovih patologija je načelo njihovog razvoja.

Hemolitička anemija je urođena patologija, stječe se hemoglobinurija. Neispravni eritrociti mogu se proširiti i na druge čvrste elemente vaskularne tekućine: leukocite i trombocite.

Simptomi noćne hemoglobinurije

Simptomi Markiafava-Michelijeve bolesti ovise o uzročnoj klasifikaciji patologije. Kao što je utvrđeno, bolest može biti neovisna, prema tome se razlikuje idiopatski oblik PNH. Zbog razvoja patologije u pozadini aplastične anemije, paroksizmalna noćna hemoglobinurija poprima oblik sindroma. Idiomatski oblik PNH, koji se javlja u pozadini hipoplazije hematopoeze, smatra se najrjeđim.

Nemoguće je izdvojiti različite simptome za bilo koji oblik bolesti, jer je vrlo varijabilna. Tijek bolesti može izvana biti asimptomatski, u tom se slučaju patologija može otkriti samo laboratorijskom dijagnozom. Ostali bolesnici imaju ozbiljan anemični sindrom.

Općenito, može se utvrditi mala generalizacija svih mogućih manifestacija noćne hemoglobure, čime se ističe glavna simptomatska slika.

• Proces hemolize (uništavanje eritrocita i hemoglobina) događa se uglavnom noću (noćna hemoglobinurija), stoga će s jutarnjim mokrenjem boja urina dobiti tamnosmeđu boju. Danju i navečer se ovaj znak ne primjećuje.
• Zbog kvantitativnog smanjenja krvi crvenih krvnih stanica, opaža se anemični sindrom. Njegove su manifestacije izravno povezane s gladovanjem organa i tkiva kisikom. Stoga pacijent može osjetiti glavobolju, vrtoglavicu, treperenje crnih točkica pred očima, opću slabost, brzi umor, napade angine pektoris i tahikardiju.

• U slučaju popratnih zaraznih bolesti, krvarenja, tjelesnog napora itd., Može se razviti hemolitička kriza, koja se očituje naglim skokom količine hemoglobina u krvožilnoj tekućini, kao i teška malaksalost, povišena temperatura, bolovi u kostima, žutost kože i umjerena splenomegalija ( povećanje slezene).
• Hemoglobinurija je popraćena kršenjem koncentracije dušikovog oksida u plazmi, što i u pozadini kriza i u teškoj patologiji uzrokuje erektilnu disfunkciju kod muškaraca.
• Zbog oštećenja trombocita (krvnih stanica odgovornih za zgrušavanje krvi) može doći do tromboze koja se najčešće opaža u venama. Isti postupak može izazvati tvar koja se oslobađa kada se solidne krvne stanice unište. Uzrokuje povećanu koagulabilnost vaskularne tekućine, o čemu ovisi sklonost ka trombozi. Takva kršenja mogu biti fatalna.

Najjasniji simptomi paroksizmalne noćne hemoglobinurije mogu se dobiti laboratorijskom dijagnozom. Studije će pokazati razinu hemoglobina u krvi, stanje stanica, prisutnost trombopenije i leukopenije, razinu željeza i drugih mikroelemenata itd. Potrebno je puno vremena za potpuno i točno dijagnosticiranje hemoglobinurije, budući da se ova bolest može pažljivo sakriti pod krinkom drugih patologija.

Stoga je najracionalniji način pravovremenog otkrivanja Markiafava-Michelijeve bolesti redoviti preventivni pregled.

Liječenje paroksizmalne noćne hemoglobinurije

Razdoblje otkrivanja paroksizmalne noćne hemoglobinurije određuje potrebne terapijske metode i utvrđuje prognozu ishoda patologije, što je u većini slučajeva nepovoljno. To je zbog odsutnosti određenog uzroka razvoja i nemogućnosti njegovog uklanjanja. Stoga ne postoji određena metoda liječenja PNH-om.

Sve terapijske mjere usmjerene su na uklanjanje simptomatskih manifestacija. Jedini učinkovit način da se u potpunosti riješite mutiranih stanica je transplantacija crvene koštane srži (mjesto stvaranja krvnih stanica).

S razvojem hemolitičke krize, akutnog oblika hemolize, pacijentu se propisuju višestruke transfuzije mase eritrocita. Takvih transfuzija može biti 5 ili više. Broj zahvata i njihova učestalost utvrđuju se ponovljenim analizama i provode se pri sljedećoj reprodukciji oštećenih eritrocita.

U rijetkim se slučajevima uklanja slezena. Znakovi koji vode do splenektomije su nagli porast organa i manifestacija razvoja infarktnog stanja.

Preostale terapijske mjere sastoje se u uzimanju lijekova različitih skupina koji olakšavaju tijek patologije. Glavni lijekovi su pripravci iz skupine steroidnih hormona, citostatici, kao i pripravci od željeza i folne kiseline.

Nerobol

Najčešći u imenovanju liječnika za borbu protiv simptomatske manifestacije paroksizmalne noćne hemoglobinurije je lijek Nerobol. To je hormonalni lijek iz skupine anaboličkih steroida. Djelovanje lijeka usmjereno je na:

• za poticanje sinteze bjelančevina u tijelu pacijenta, što nije dovoljno u oštećenoj membrani eritrocita;
• povoljno djeluje na metabolizam dušika;
• odgađa izlučivanje kalija, sumpora i fosfora, potrebnih za normalnu sintezu proteina;
• izaziva povećanu fiksaciju kalcija u kostima.

Nakon uzimanja ovog lijeka, pacijent osjeća porast apetita, intenzivan porast mišićne mase, ubrzanje kalcifikacije kostiju, kao i puno bolje opće stanje tijela.

Upotreba lijeka započinje s 10 g, postupno povećavajući se na 30 g, 1-2 doze dnevno. Za djecu je doza lijeka 1 tableta svaki drugi dan, u težim slučajevima, svakodnevno. Tijek terapije Nerobolom je 2 do 3 mjeseca.

Nakon prestanka primjene lijeka, kod mnogih se bolesnika opaža porast hemolize.

Korištenje Nerobola može se provoditi strogo na recept liječnika.

Heparin

Heparin je izravni antikoagulant - sredstvo za inhibiciju zgrušavanja krvi. S paroksizmalnom noćnom hemoglobinurijom, propisano je za sprečavanje nastanka krvnih ugrušaka, koji kompliciraju tijek bolesti.

Doziranje i učestalost primjene potpuno su individualizirani, ovisno o složenosti patologije i riziku od nastanka krvnih ugrušaka u žilama.

Na kraju tečaja s Heparinom, liječnik propisuje neizravne antikoagulanse kako bi održao normalnu razinu koagulacije.

Ekulizumab je lijek koji se sastoji od humaniziranih monokanalnih antitijela. Načelo djelovanja lijeka je zaustaviti intravaskularnu hemolizu i izravno se suprotstaviti krvnim komplimentima. Kao rezultat, prirodno uništavanje oštećenih eritrocita od strane imunološkog sustava tijela prestaje.

Ovaj lijek je najskuplji lijek na svijetu. Njegov mehanizam djelovanja i razvoj mogućih posljedica uporabe nisu dovoljno proučeni.

Pripravci željeza i folne kiseline

U slučaju poremećaja u radu crvene koštane srži, javlja se nedostatak željeza i folne kiseline koji su neophodni za normalno stvaranje krvi. Terapija liječenja PNH uključuje davanje pripravaka ovih mikroelemenata za nadoknađivanje patoloških gubitaka.

Doziranje i način uzimanja lijeka određuje liječnik koji dolazi. Najčešće se propisuju Sorbifer, Tardiferron, Ferretab, Fenuls itd. Ovi lijekovi uključuju kompleks elemenata u tragovima neophodnih za normalno stvaranje čvrstih čestica krvi u crvenoj koštanoj srži.

Podrška jetri

Pojačana terapija u borbi protiv paroksizmalne noćne hemoglobinurije snažno utječe na jetru. U nedostatku suportivne terapije za jetru, ona može jednostavno odbiti. Stoga je važno uzimati lijekove s hepatoprotektivnim djelovanjem. Ti lijekovi mogu biti:

• Maksar;
• Heptral;
• Carsil.

Osim toga, postoji niz namirnica koje mogu pomoći u popravljanju stanica jetre. To uključuje buču, suhe marelice, alge, maslinovo ulje, mliječne proizvode i još mnogo toga. Glavna stvar je ne pogoršati ju junk hranom u trenucima slabosti jetre.

Nakon prepoznavanja bolesti, liječnici daju netočna predviđanja. Statistika kaže da nakon uspostavljanja dijagnoze pacijent može živjeti na terapiji održavanja oko 5 godina.

Zbog nepoznatog podrijetla bolesti i netočnosti u uzrocima njezinog razvoja, paroksizmalna noćna hemoglobinurija ne može se spriječiti.

zaključci

Markiafava-Michelijeva bolest ili paroksizmalna noćna hemoglobinurija ozbiljna je bolest koja može biti kobna čak i uz intenzivnu terapiju. Jedinim mogućim oporavkom smatra se transplantacija crvene koštane srži u kojoj nastaju krvne stanice. Osim toga, patologija podrazumijeva razvoj popratnih bolesti, koje nisu ništa manje opasne za stanje pacijenta.

Stoga liječnici jednoglasno izjavljuju da je najbolja metoda za sprečavanje bilo kakve patologije redovito podvrgavanje cjelovitom liječničkom pregledu. Možda, ako je bolest tek u fazi formiranja, može se trajno ukloniti. S takvim ozbiljnim bolestima, vrijeme je glavno pitanje. Trebali biste se brinuti o sebi i svom tijelu.

U ovoj skupini bolesnika nema obiteljske tendencije prema anemiji, istodobnih kongenitalnih anomalija i poremećaja u neonatalnom razdoblju. Aplastična anemija može se pojaviti u bilo kojoj dobi kod djece i odraslih, ponekad može biti povezana sa specifičnom opijenošću ili infekcijom, ali često se takav odnos ne opaža i tada se anemija smatra "idiopatskom".

Pojedini lijekovi, poput 6-merkaptopurina, metotreksata, ciklofosfamina i busulfana, imaju određenu predvidivu sposobnost ovisnosti o dozi da inhibiraju koštanu srž. Ako se ova depresija nastavi, to će dovesti do aplazije koštane srži, koja se obično brzo povuče nakon prestanka uzimanja lijeka. Ti lijekovi oštećuju normalne stanice koštane srži istim mehanizmom kao i inhibiranjem rasta leukemičnih stanica. Biokemijski principi njihova djelovanja prilično su dobro shvaćeni. Radijacijska ozljeda koštane srži pripada istoj kategoriji.

Ostali lijekovi, kao što su akrihin, kloramfenikol, fenilbutazon i antikonvulzivi, koji se daju u normalnim terapijskim dozama, kod vrlo malo ljudi mogu uzrokovati aplaziju duboke koštane srži i tu se aplaziju ne može unaprijed predvidjeti. Često je nepovratan i otprilike polovica pacijenata umre. U ovu kategoriju spada i opijenost insekticidima poput DDT-a i nekim organskim otapalima. Često je nejasno može li anemija biti povezana s određenim lijekom. Preduvjet za takvu vezu je uzimanje lijekova u zadnjih 6 mjeseci. Najpoznatiji i proučavan od njih je kloramfenikol. Ovaj je lijek na vrhu popisa poznatih etioloških agenasa u skupini bolesnika s stečenom aplastičnom anemijom koju su opisali Scott i sur., I u istim skupinama bolesne djece u Shahidiju. Gurman je tijekom 8 godina u Sydneyu promatrao 16 slučajeva u kojima je bolest povezana, kako se pretpostavlja, s unosom kloramfenikola. Apsolutna učestalost fatalne stečene aplastične anemije u populacijama u kojima nije bila poznata nikakva izloženost bilo kojem opasnom lijeku, a bila je poznata i izloženost različitim lijekovima, uključujući kloramfenikol.

Liječenje kloramfenikolom povećava vjerojatnost razvoja aplastične anemije za 13 puta, ali također je jasno da je to povećanje malo. Za ostale lijekove rizik je još manji. Međutim, Britanski odbor za sigurnost lijekova preporučuje da se kloramfenikol sistemski koristi za sve bolesti, osim tifusne groznice i hemofilnog gripnog meningitisa, tek nakon pažljivih kliničkih i obično laboratorijskih ispitivanja koja ukazuju da drugi antibiotik neće biti dovoljan. Nikada se ne smije sustavno koristiti za banalnu infekciju.

Mehanizam razvoja aplastične anemije pod utjecajem kloramfenikola nije jasan. Pojava aplastične anemije nije povezana s dozom i trajanjem liječenja, niti se može objasniti nedovoljnim izlučivanjem kod osjetljivih osoba. In vitro je moguće dokazati potiskivanje sinteze nukleinskih kiselina u normalnim stanicama koštane srži, ali samo pri takvoj koncentraciji lijeka koja prelazi onu koja se koristi in vivo. Predloženo je da se male količine kloramfenikola mogu konzumirati u mlijeku krava liječenih od mastitisa, te da te male količine mogu senzibilizirati koštanu srž na terapijske doze korištene kasnije. Također se sugerira da postoji neotkrivena sinergija s drugim lijekovima, koji su vjerojatno bezopasni kada se koriste samostalno. Raspravljajući o etiologiji pancitopenične smrtonosne aplazije uzrokovane kloramfenikolom, valja napomenuti da u značajnog dijela pacijenata koji primaju ovaj lijek postoji potpuno drugačija, reverzibilna i o dozi ovisna depresija koštane srži. U 10 od 22 pacijenta koji su primali kloramfenikol, u ranim eritroblastima koštane srži pronađene su višestruke velike vakuole, što je često bilo popraćeno padom broja eritrocita i retikulocita. Te promjene nestaju tjedan dana nakon prestanka uzimanja lijeka. Njihov razvoj, očito, olakšavaju povećane doze, odgođeni klirens iz plazme i ubrzana eritropoeza. Iste vakuole mogu se vidjeti i s nedostatkom fenilalanina ili riboflavina.

S obzirom na etiologiju drugih aplazija izazvanih lijekovima, uvijek je postojalo iskušenje da se predloži djelovanje imunoloških mehanizama, moguće vrste lijekova - haptena. Međutim, ti mehanizmi nikada nisu demonstrirani. Samo u jednoj kliničkoj situaciji, naime u slučaju reakcije presadka naspram domaćina u imunološki nekompetentne novorođenčadi koja su primila transfuziju, utvrđeno je imunološko porijeklo aplastične anemije. Razvoj izražene anafilaktoidne reakcije nakon slučajnog ponovljenog kontakta s DDT-om u osjetljivog pacijenta također sugerira imunološki mehanizam. Newwig je predložio tri objašnjenja za aplaziju lijeka: a) izravni i toksični učinci na stanice koštane srži, na primjer, nakon kronične industrijske izloženosti benzenu; b) istinska alergija, čija se manifestacija brzo javlja nakon kontakta s malom dozom; c) dugotrajni kontakt s visokim dozama, tj. "alergija na velike doze". Ovo je najčešći oblik. Autor to objašnjava prvenstveno oštećenjem staničnih membrana. Također se može pretpostaviti genetska predispozicija, na što ukazuje slučaj diskrazije krvi nakon kontakta s kloramfenikolom kod jednojajčanih blizanaca. Nedavno su u Lancetu objavljeni pregledni članci o Newwigovoj medicinskoj aplastičnoj anemiji.

Slični problemi nastaju u vezi s prethodnim razvojem aplastične anemije virusnom infekcijom. Ovaj je fenomen dobro proučen kod zaraznog hepatitisa. Aplastična anemija u 5 bolesnika u dobi od 4 do 19 godina razvila se 1-7 tjedana nakon početka hepatitisa. Opisani su brojni slični slučajevi, uključujući 3 slučaja Schwartz i sur. Ovi su autori primijetili da kod zaraznog hepatitisa često dolazi do privremenog smanjenja broja granulocita, trombocita i hemoglobina te da progresivne promjene koje dovode do aplazije koštane srži u vrlo malog broja bolesnika mogu predstavljati nastavak cijelog procesa, što vjerojatno ovisi o genetskoj predispoziciji. Ovdje možete vidjeti analogiju s intoksikacijom kloramfenikolom. Pancitopenija s prolaznom hipoplazijom koštane srži također je opisana u vezi s nizom infekcija uzrokovanih virusima RNA, uključujući mikroviruse rubeole i gripe, viruse parainfluence, zauške i viruse ospica. Dvije eksperimentalne virusne infekcije kod miševa, tj. MVH-3 i trinidadski soj venezuelskog konjskog encefalitisa, uzrokuju pancitopeniju i hipoplaziju koštane srži, a virus se može cijepiti iz koštane srži. Kao i kod ostalih uzroka aplastične anemije, pretpostavlja se autoimuni proces.

U približno polovici stečene aplastične anemije nema povijesti ozbiljne prethodne infekcije ili izloženosti toksičnim agensima. Wolf je objavio velik materijal, uključujući 334 slučaja stečene pancitopenije, a u 191 slučaju, odnosno 57,2%, anemija je prepoznata kao idiopatska.

U Gurmanovom je materijalu relativni broj bolesnika s idiopatskom anemijom bio manji, odnosno 28 od 104 koji su patili od stečene aplazije. U 5 od 17 slučajeva na temelju Shahidijevih materijala i u 5 od 9 slučajeva na temelju Despositovog materijala, anemija je bila idiopatska. Još nije jasno jesu li bolesti u tim slučajevima uzrokovane infekcijom neidentificiranim virusom. Čini se da se barem neki od idiopatskih slučajeva uklapaju u posebnu skupinu koja bi se u aplastičnoj fazi mogla nazvati pre-leukemija ili leukemija.

Melhorn i suradnici opisuju 6 \u200b\u200bdjece kojima je na temelju snažnih, neospornih dokaza dijagnosticirana aplastična anemija u dobi od 1 godine 11 mjeseci do 6 godina, ali je sva ta djeca nakon 9 tjedana do 20 mjeseci razvila akutnu limfoblastnu leukemiju ... U ovih 6 pacijenata uočeno je jedno zajedničko obilježje - brži terapijski učinak od uobičajenog u usporedbi s aplastičnom anemijom na početnoj terapiji kortikosteroidima. Gurman je primijetio isto, a također smo primijetili ovaj učinak u jednom slučaju, u kojem se akutna limfoblastična leukemija razvila nakon 3 mjeseca. Ovaj brzi odgovor pancitopenije na samo liječenje kortikosteroidima značajno se razlikuje od uobičajenog nedostatka odgovora u drugim slučajevima aplastične anemije. Treba napomenuti da je opisana slična leukemijska transformacija aplastične anemije uzrokovane benzenom i kloramfenikolom.

Stečeni simptomi aplastične anemije

Newman i suradnici opisali su 14 djece s idiopatskom pancitopenijom i napomenuli da, uz tri glavna znaka - anemiju, vrućicu i purpuru, postoje i važni negativni znakovi, tj. Odsutnost hepatosplenomegalije, limfadenopatije, čira na usnoj šupljini i žutice. Međutim, može se primijetiti purpura usne sluznice i krvarenje iz zubnog mesa. Ponekad može postojati upalna limfadenopatija povezana s lokalnom sepsom.

Ako dijete razvije crvenu mokraću, tada treba pretpostaviti razvoj paroksizmalne noćne hemoglobinurije.

Laboratorijska dijagnostika

Aminacidurija, primijećena u oko polovice bolesnika s ustavnim oblikom, je odsutna i nema zaostajanja u koštanoj dobi.

Više od polovice odraslih pacijenata koji boluju od ove bolesti imaju limfopeniju i hipogamaglobulinemiju sa subnormalnom razinom IgG.

{!LANG-d357b74e578267ddd72d092b11537ed5!}{!LANG-e2009804fddc9e34f9984125ba8e370e!}

{!LANG-32851d89411a118ee6565a5d7b8ffce3!}

{!LANG-1a9634c263c7fc6ce7481568a833ba59!}

Liječenje

{!LANG-3910c97706eed6d02782b0772df01e0d!}

{!LANG-86fc8b9b643e04289d5036ed52a22f54!}{!LANG-98af28f458ee9a6cfebc43a6b42b21b4!}

{!LANG-2ab9f717a328f0d8c9286581c5ef9b2b!}

{!LANG-fa1c71f1ad2c46161792c5648e02010a!}

{!LANG-532a7819240d50e4025045cf424ebd31!}

{!LANG-9ecaf4d87f776974380c5a221f73c3fc!}

{!LANG-6539375da8f29049adcd1d838e134dc0!}

{!LANG-54b2ccd9edb6ad663dcec32c175e1d12!}{!LANG-4e5a94a8b759f14380c63914d78b0ac5!}

{!LANG-74e87a5437dca7c9daf52401934f0c88!}{!LANG-775f2b2e33540f2131bda429b6af9d8b!}

{!LANG-c31e598fb55bfff285b5db024086d65a!}{!LANG-60ee3b92b58a995507661e26c2e77674!}

{!LANG-1c6c3de50cff62f04a59fea413ba2f39!}

{!LANG-57ce85f0eafb61ab0e6773eea96e3597!}